糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中SDF-1和VEGF的分子生物學表達及AMD3100對其的干預.pdf

1、目的:本實驗通過建立糖尿病大鼠模型，測定不同時期視網(wǎng)膜中基質(zhì)細胞衍生因子-1(SDF-1)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的含量，研究它們二者與糖尿病視網(wǎng)膜病變的相關性。并應用SDF-1拮抗劑AMD3100，探索AMD3100對該模型大鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用，以及抑制效果和AMD3100劑量的關系，為探討糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機理和治療提供新的思路。
　　 方法:
　　 1.50只健康雄性成年SD大鼠隨機分為正常組、糖

2、尿病組、拮抗劑組。糖尿病組和拮抗劑組于禁食12小時后一次性腹腔注射鏈脲佐菌素65mg/kg。拮抗劑處理組為糖尿病建模成功后2周玻璃體及球后注射注射SDF-1拮抗劑AMD3100。成模后1月、3月、5月分別提取各組視網(wǎng)膜總RNA， RT-PCR法檢測SDF-1和VEGF mRNA的表達量變化，所得數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進行分析。并對SDF-1和VEGF的mRNA水平進行雙變量相關分析，HE染色觀察各組視網(wǎng)膜形態(tài)學改變。
　　

3、2.18只SD大鼠隨機分為正常對照組，糖尿病對照組，及4組不同劑量的拮抗劑組，成模后繼續(xù)飼養(yǎng)3月。拮抗劑組在糖尿病建模成功后2周玻璃體腔及球后注射不同濃度的AMD3100（濃度分別為2.5ug/ul，5ug/ul，10ug/ul，15ug/ul），到期后蛋白免疫印跡(western blot)法檢測各組大鼠視網(wǎng)膜SDF-1、VEGF蛋白的表達量變化，測定其光密度值，所得數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進行分析。
　　 結(jié)果:
　

4、　 1.PCR
　　 1.1各組SDF-1 mRNA含量的比較:正常組、拮抗劑組和糖尿病組視網(wǎng)膜上均有SDF-1 mRNA的表達，且同齡組中糖尿病組的表達顯著性增高，差異有統(tǒng)計學意義，且DM大鼠視網(wǎng)膜組織里SDF-1 mRNA的表達量隨著病程的延長而增加（DM1、DM3、DM5兩兩相比，P＜0.05）;和同齡正常對照組大鼠相比較，DM大鼠視網(wǎng)膜組織里SDF-1 mRNA的表達量1月時就明顯升高，3個月時明顯增高，5個月時差異更

5、為顯著;和同齡正常對照組大鼠相比較，拮抗劑組大鼠視網(wǎng)膜組織里SDF-1 mRNA的表達量均輕度升高;和同齡拮抗劑組大鼠相比較，糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜組織里SDF-1 mRNA的表達量均升高。
　　 1.2各組VEGF mRNA含量的比較:正常組、拮抗劑組和糖尿病組視網(wǎng)膜上均有VEGFmRNA的表達，且同齡組中糖尿病組的表達顯著性增高，差異有統(tǒng)計學意義，且DM大鼠視網(wǎng)膜組織里VEGF mRNA的表達量隨著病程的延長而增加;和同齡正常對

6、照組大鼠相比較，DM大鼠視網(wǎng)膜組織里VEGFmRNA的表達量1月時就明顯升高，3個月時mRNA明顯增高，5個月時差異更為顯著;和同齡正常對照組大鼠相比較，拮抗劑組大鼠視網(wǎng)膜組織里VEGF mRNA的表達量均輕度升高;和同齡拮抗劑組大鼠相比較，糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜組織里VEGF mRNA的表達量均升高。
　　 1.3數(shù)據(jù)進行雙變量相關處理顯示，SDF-1與VEGF水平呈正相關。
　　 2.HE染色:(1)形態(tài)學觀察:拮抗劑組

7、與同齡糖尿病組相比差異明顯，更接近于正常對照組。(2)突出內(nèi)界膜的細胞核計數(shù):與同齡糖尿病組相比，拮抗劑組、正常組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細胞核數(shù)均減少，糖尿病組隨著病程的延長突出視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的數(shù)目逐漸增多，DM1、DM3、DM5三者比較有統(tǒng)計學意義。
　　 3.WB:各組SDF-1和VEGF蛋白含量的比較:糖尿病組大鼠與拮抗劑各組大鼠相比，視網(wǎng)膜組織中SDF-1和VEGF的蛋白表達量明顯升高，差異有顯著性，隨著SDF-1拮抗劑A

8、MD3100濃度的增大，SDF-1和VEGF的蛋白表達量逐漸減少，差異具有顯著性（2、3組，3、4組兩兩相比，P＜0.001），當增加到10ug/ul時，繼續(xù)增加濃度，SDF-1和VEGF的蛋白表達量無明顯改變，差異沒有統(tǒng)計學意義（4、5組相比，P＞0.05），與正常組大鼠相比，糖尿病組、拮抗劑組SDF-1和VEGF的蛋白表達量均有升高，差異有統(tǒng)計學意義(糖尿病組P＜0.001，拮抗劑組P＜0.01)。
　　 結(jié)論:隨著糖尿病視