人糞便中OSMR和TFPI2基因甲基化在大腸癌診斷中的意義.pdf

1、大腸癌(colorectal cancer，CRC)是常見的消化道腫瘤，通過檢測(cè)并切除腺瘤性息肉能有效的降低大腸癌發(fā)病率，而且，如果檢測(cè)到的大腸癌仍然為局限性病變，那么治療后生存率較高。大腸癌篩查的目的是通過減少高級(jí)病變來減低死亡率。目前，有許多大腸癌篩查手段，最終可以分為兩大類，一類是糞便檢測(cè)，包括糞便隱血試驗(yàn)和糞便DNA檢測(cè)，另一類為結(jié)構(gòu)性檢測(cè)。糞便檢測(cè)最適合于檢測(cè)癌癥，也能發(fā)現(xiàn)一部分高級(jí)腺瘤，而糞便檢測(cè)當(dāng)中糞便DNA檢測(cè)有著更高的

2、敏感性與特異性。
　　 OSMR是腫瘤抑瘤素M(OSM)的受體，OSM屬于IL-6家族，一般認(rèn)為IL-6型細(xì)胞因子能夠抑制腫瘤細(xì)胞。最初發(fā)現(xiàn)OSM能夠抑制體外黑色素瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，還能抑制包括肺癌、卵巢癌和乳腺腫瘤的生長(zhǎng)。OSM的介導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)是由gp130和osmr形成的異二聚體介導(dǎo)的，目前有研究表明，在轉(zhuǎn)移的黑色素瘤細(xì)胞中，OSM失去對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的控制是由于異常的組蛋白修飾導(dǎo)致OSMR基因的表觀遺傳沉默，癌組織中OSMR的水平

3、是降低的。
　　 組織因子途徑抑制劑(tissue factor pathway inhibitor，TFPI2)，一個(gè)Kunitz-type絲氨酸蛋白酶抑制劑，能夠抑制癌細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解及癌細(xì)胞體外克隆形成和增殖。TFPI2功能的喪失使細(xì)胞易于發(fā)生侵襲，這可能是其參與癌癥后期發(fā)展的重要方式。
　　 表觀遺傳(epigenetics)是指不涉及基因組DNA序列的改變而在細(xì)胞分裂中可以遺傳給子代細(xì)胞的基因組

4、修飾。DNA甲基化及組蛋白乙酰化修飾是表觀遺傳修飾的主要方式。DNA甲基化改變常常是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的早期事件，而且表觀遺傳事件發(fā)生的幾率要高于遺傳事件，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)獲得較高的敏感性與特異性。
　　 目的
　　 探討檢測(cè)人糞便中Oncostatin M Receptor(OSMR)基因和tissue factorpathway inhibitot(TFPI2)基因甲基化對(duì)于大腸癌及腺瘤診斷的可行性及臨床意義。

5、
　　 材料與方法
　　 從2009年5月到2010年9月，我們選取77個(gè)來自鄭大一附院的患者，包括60例結(jié)直腸癌患者和17例腺瘤患者及30例正常對(duì)照，所有標(biāo)本都經(jīng)過病理證實(shí)，30例年齡匹配的健康人為正常對(duì)照組，全結(jié)腸鏡檢查均顯示全結(jié)腸粘膜未發(fā)現(xiàn)異常。糞便標(biāo)本于術(shù)前或內(nèi)鏡檢查前收集，收集后立即送至實(shí)驗(yàn)室，置-70℃冰箱保存。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理后，用QIAamp DNA Stool Mini kit(QIAGEN，德國(guó))試劑

6、盒提取DNA并保存-20℃冰箱中。再按照EpiTect BisulfiteKit(Qiagen)試劑盒操作說明書，進(jìn)行DNA的亞硫酸氫鹽修飾和純化，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。以重亞硫酸氫鹽修飾后的DNA作為甲基化特異性PCR的模板，檢測(cè)TFPI2和OSMR基因甲基化狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，基因頻率采用直接計(jì)數(shù)法，各組間率的比較采用X2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)結(jié)果以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1.

7、60例大腸癌患者糞便中OSMR及TFPI2基因甲基化檢出率分別為35％(21/60)和70％(42/60)；17例腺瘤患者糞便OSMR及TFPI2基因甲基化檢出率分別為12％(2/17)和18％(3/17)；二者聯(lián)合檢測(cè)大腸癌陽(yáng)性率為85％(51/60)；30例正常對(duì)照糞便中OSMR基因、TFPI2基因甲基化檢出率為7％(2/30)和3％(1/30)。
　　 2.TFPI2基因甲基化狀態(tài)改變與患者性別和腫瘤發(fā)生部位沒有明顯的相關(guān)

8、性(P>0.05)。
　　 3.OSMR基因甲基化狀態(tài)改變與患者性別和腫瘤發(fā)生部位及duke分期沒有明顯的相關(guān)性(P>0.05)。
　　 4.TFPI2基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化在Dukes分期A、B和C、D期中發(fā)生率分別為57％和81％，差異顯著(P<0.05)；低分化腫瘤組織中TFPI2基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生率為86％，中、高分化腫瘤組織中TFPI2基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生率為61％，二者差異顯著(P<0.05)。
　　

9、5.低分化腫瘤組織中OSMR基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生率為55％，中、高分化腫瘤組織中OSMR基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生率為24％，二者差異非常顯著(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.TFPI2和OSMR基因甲基化檢測(cè)可能成為大腸癌無創(chuàng)診斷的分子標(biāo)志物之一。
　　 2.TFPI2基因甲基化的陽(yáng)性狀態(tài)與大腸癌患者的腫瘤Dukes分期和腫瘤組織分化程度明顯相關(guān)，與大腸癌患者的性別和腫瘤部位無明顯相關(guān)。
　　 3.O