大腸癌組織中EDNRB啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)檢測(cè).pdf

1、目的：大腸癌是全球最常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。EDNRB是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的潛在的腫瘤抑制基因，它曾被報(bào)道在多種腫瘤中通過(guò)啟動(dòng)子甲基化引起基因表達(dá)沉默。然而，EDNRB基因在大腸癌的功能尚不清楚。在本研究中，我們研究了 EDNRB在大腸癌組織及對(duì)照組織中的DNA甲基化狀態(tài)、mRNA表達(dá)水平，及其與臨床數(shù)據(jù)的關(guān)聯(lián)。
　　方法：1、大腸癌組織樣本收集：本研究收集了2012年6月至2013年4月之間在某醫(yī)院胃腸外科、肛腸外科及腫瘤外科接受手

2、術(shù)治療的大腸癌患者的癌組織及正常組織各42例。切取標(biāo)本時(shí)，正常組織標(biāo)本距離腫瘤至少5cm。組織被切下后立即放入液氮中凍存，之后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱保存。2、MSP：使用離心柱法提取42對(duì)大腸癌組織和正常對(duì)照組織的DNA，檢測(cè) DNA的濃度和質(zhì)量，采用亞硫酸氫鹽修飾法進(jìn)行甲基化轉(zhuǎn)化，修飾后的DNA用于 PCR擴(kuò)增模板。最后，將 PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳。3、qRT-PCR：使用TRIzol試劑提取42對(duì)大腸癌組織和正常對(duì)照組織的RNA，檢測(cè)

3、RNA的濃度和質(zhì)量，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，合成的cDNA根據(jù)兩步法行 qRT-PCR擴(kuò)增，記錄下儀器中的擴(kuò)增曲線、溶解曲線、Ct值，并且將 qRT-PCR產(chǎn)物行凝膠電泳，以鑒定產(chǎn)物的特異性。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：EDNRB啟動(dòng)子甲基化的比較采用卡方檢驗(yàn)的校正公式。2–ΔCt法用于分析qRT-PCR的結(jié)果。采用配對(duì) t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組相關(guān)數(shù)據(jù)間比較。兩組獨(dú)立樣本不符合正態(tài)性檢驗(yàn)，則采用Mann-Whiteney U檢驗(yàn)比較。認(rèn)為p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。

4、
　　結(jié)果：通過(guò) MSP檢測(cè)，42例大腸癌組織的EDNRB基因啟動(dòng)子甲基化率（陽(yáng)性率為92.86％）明顯高于42例正常對(duì)照組織 EDNRB基因啟動(dòng)子甲基化率（陽(yáng)性率為59.52%）。大腸癌組織 EDNRB甲基化率與大腸正常組織甲基化率相比，差異有顯著意義（p=0.001）。另外我們研究了 EDNRB基因甲基化狀態(tài)和大腸癌患者的臨床特征之間的關(guān)聯(lián)，結(jié)果顯示它們之間均沒(méi)有顯著關(guān)聯(lián)。
　　通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)，42例大腸癌組織的

5、EDNRB mRNA表達(dá)水平（0.31±0.91）明顯低于42例正常對(duì)照組織 EDNRB mRNA表達(dá)水平（0.70±1.18）。大腸癌組織 EDNRB mRNA表達(dá)水平與大腸正常組織 EDNRB mRNA表達(dá)水平相比，差異有顯著意義（p=0.032）。另外我們研究了 EDNRB基因 mRNA表達(dá)水平和大腸癌患者的臨床特征之間的關(guān)聯(lián)，結(jié)果顯示它們之間均沒(méi)有顯著關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論：
　　本研究工作以大腸癌組織、正常對(duì)照組織為研究

6、對(duì)象，研究大腸癌組織中EDNRB基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)及 mRNA表達(dá)水平，得出以下結(jié)論：
　　1、大腸癌組織中 EDNRB基因啟動(dòng)子甲基化率較高，而正常對(duì)照組織 EDNRB基因啟動(dòng)子甲基化率較低。
　　2、大腸癌組織中 EDNRB基因啟動(dòng)子甲基化水平與大腸癌患者的臨床特征之間無(wú)明顯相關(guān)性。
　　3、大腸癌組織中 EDNRB mRNA表達(dá)水平較低，而正常對(duì)照組織 EDNRB mRNA表達(dá)水平較高。
　　4、大腸癌組