糞便c-ki-ras2基因點突變檢測診斷大腸癌.pdf

1、目的大腸癌(colorectalcancer,CRC)是一種常見消化道腫瘤，早期的診斷和治療與患者預(yù)后密切相關(guān)。研究證實糞檢基因(StoolDNAtesting)是有效的非侵入性早期診斷手段。c-ki-ras2基因在大腸癌點突變率較高，本實驗通過研究大腸癌患者糞便c-ki-ras2基因外顯子1第12位密碼子的前兩位堿基點突變情況，并與相應(yīng)組織DNA對照，探討用糞便c-ki-ras2基因點突變檢測診斷大腸癌的價值。 材料與方法提取

2、經(jīng)腸鏡活檢病理確診的25例大腸癌患者糞便、腫瘤組織和癌旁組織黏膜的DNA，結(jié)合限制性內(nèi)切酶MvaI，用突變富集型聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(mutant-enrichedPolymerasechainreactionRestrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP)方法，分析上述標本c-ki-ras2基因外顯子1的12位密碼子第一、二位堿基是否存在點突變。用同樣方法檢測健康體檢者17例

3、以作對照。特異性分析采用經(jīng)克隆測序已知突變型(12GGT→AGT)及野生型的K-RAS外顯子1片段，對照結(jié)果。敏感性分析運用已知含有突變的肺腺癌細胞株A549(12GGT→AGT)與正常人結(jié)腸黏膜上皮細胞。取同期住院的166例胃腸道疾病患者(大腸癌、消化道出血、炎癥性腸病、腸道憩室、痔瘡)大便潛血(Fecaloccultbloodtest，F(xiàn)OBT)檢查資料作對照，比較FOBT和糞檢DNA檢測的敏感性、特異性。 2結(jié)果大腸癌患者

4、糞便c-ki-ras2基因點突變率28％(7/25)，其中6例在相應(yīng)癌組織中同樣檢出突變，糞便與組織DNA檢測結(jié)果高度一致(Kappa=0.896,p＜0.01)。正常人糞便與癌旁黏膜均未發(fā)現(xiàn)突變，與大腸癌組織相比差異均有顯著性(p＜0.05)。 同期住院的166例胃腸道疾病患者中，F(xiàn)OBT檢測陽性85例，敏感性51.2％，其中大腸癌74例，陽性率58％(43/74)。 糞檢c-ki-ras2基因點突變方法特異性達100

5、％，比FOBT(50.6％)高。糞檢單個c-ki-ras2基因點突變敏感性28％，比FOBT低(58％)。c-ki-ras2點突變可能更多發(fā)生在左半結(jié)腸，與其他部位結(jié)腸相比差異有顯著性(p＜0.05)；與性別、年齡、分化程度、Duck's分期等臨床病理參數(shù)無關(guān)。 結(jié)論1.糞檢c-ki-ras2基因點突變特異性優(yōu)于FOBT，但單個基因檢測敏感性小于FOBT(28％vs58％)，診斷大腸癌有一定價值。 2.用突變富集型PCR