夏枯草提取物聯(lián)合化療藥對淋巴瘤細胞的作用.pdf

1、背景和目的：
　　 惡性淋巴瘤（MalignantLymphoma，ML）是起源于人類免疫系統(tǒng)細胞及其前體細胞的惡性增生性疾病。在我國ML發(fā)病率為惡性腫瘤的第11位，常發(fā)生在青壯年，嚴重威脅著人類的健康和生命。目前聯(lián)合化療是治療ML的主要手段，在延長患者生存期和提高療效方面起著重要的作用。但化療藥常引起的骨髓抑制、免疫功能低下等副反應，常使患者難以堅持治療，并且化療藥物在治療過程中出現(xiàn)的原發(fā)或繼發(fā)耐藥性已成為目前臨床治療中的難題

2、之一。因此，有必要尋求高效低毒的抗腫瘤藥物。近年來，國內(nèi)外研究人員對傳統(tǒng)中藥的抗腫瘤作用進行了廣泛而深入的研究，結果表明，許多中藥及其提取物能誘導腫瘤細胞凋亡，從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。
　　 夏枯草為唇形科夏枯草屬植物夏枯草的干燥成熟果穗，具有清火明目，軟堅散結之功效。其用于治療甲狀腺癌、淋巴肉瘤、腮腺癌、扁桃腺癌、鼻咽癌等由來已久。現(xiàn)代藥理學研究證明其具有廣泛的藥理活性，諸多體內(nèi)外實驗研究均發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤活性。但是，關于夏枯草

3、與抗腫瘤藥物聯(lián)合作用對腫瘤細胞增殖及細胞周期的影響尚未見報道。
　　 本課題通過體外抗腫瘤實驗方法觀察了經(jīng)醇煎法制成的夏枯草提取物（Pruncllavulgarisextract，PVE）聯(lián)合化療藥對人淋巴瘤Raji細胞株增殖和細胞周期的影響，以及PVE對化療藥的增效作用，并初步探討PVE聯(lián)合化療藥對Raji細胞抑制作用的機理，以期為臨床聯(lián)合用藥提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 應用體外細胞培養(yǎng)技術，MTT法檢

4、測PVE聯(lián)合紫杉醇（Paclitaxel，TAX）、多柔比星（Adriamycin，ADM）、順鉑（Cisplatin，DDP）、甲氨喋呤（Methotrexate，MTX）、長春新堿（Vincristine，VCR）、阿糖胞苷（Cytrarabine，Ara-c）對Rajii細胞的生長抑制率；流式細胞儀分析PVE與TAX聯(lián)合對Raji細胞周期分布的影響；免疫組化方法檢測PVE對Raji細胞內(nèi)survivin及caspase-3蛋白表達

5、的影響。應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多個樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，以a=0.05為檢驗水準，P<0.05有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1.夏枯草提取物對Raji細胞增殖的抑制作用不同濃度的夏枯草提取物作用于體外培養(yǎng)的Raji細胞48h后，可顯著抑制Raji細胞生長，實驗組與空白對照組相比，OD值的差異有顯著性（P<0.01），且隨著夏枯草提取物濃度的增加，其抑制率越來越高，

6、呈劑量依賴關系，其半數(shù)抑制濃度（IC50）值為30.2μg/ml。
　　 2.6種抗腫瘤藥物對Raji細胞增殖的抑制作用不同濃度的TAX，ADM，MTX，DDP，Arc-a，VCR單藥作用Raji細胞48h后，其生長可受到不同程度的抑制，且抑制效應在一定的濃度范圍內(nèi)隨著劑量的增加，細胞生長抑制率逐漸增高。
　　 3.PVE聯(lián)合6種抗腫瘤藥對Raji細胞增殖的抑制作用PVE能明顯增強TAX、DDP對Raji細胞的抑制作用，

7、且差異具有顯著性；對ADM的增敏作用在低濃度時表現(xiàn)明顯，而對Ara-c的增效作用則表現(xiàn)在較高濃度；但PVE對MTX和VCR無明顯的增強抑制Raji細胞的增殖作用。
　　 4.PVE與TAX聯(lián)合對Raji細胞周期的影響TAX及與PVE聯(lián)合作用于Raji細胞48h，均可見典型的亞二倍體凋亡峰。PVE能加強TAX對Raji細胞的作用，與TAX單用比較，PVE與TAX合用組S期細胞數(shù)下降，G2～M期細胞數(shù)升高。
　　 5.PVE

8、對Raji細胞survivin和caspase-3蛋白表達的影響通過免疫細胞化學法測定凋亡基因相關蛋白的表達結果可知：PVE（30μg/mL）作用于Raji細胞48h，survivin蛋白表達減弱，而caspase-3蛋白表達增強，對照組與加藥組間差異顯著（P<0.05）。
　　 結論：
　　 1.PVE可明顯抑制Raji細胞的增殖，且抑制作用呈劑量依賴關系，IC50值為30.2μg/ml。
　　 2.PVE可增