復(fù)發(fā)性鼻息肉分子標(biāo)志物篩選及其意義.pdf

1、第一章用功能分類基因芯片技術(shù)研究鼻息肉組織中JAK-STAT、NF-κΒ和MAPK信號(hào)通路中的分子標(biāo)志物
　　 目的:應(yīng)用功能分類基因芯片技術(shù)研究復(fù)發(fā)性鼻息肉組織的相關(guān)基因,并探討其在鼻息肉發(fā)病和復(fù)發(fā)中的作用。
　　 方法:分別抽提檢測(cè)10例鼻息肉組織、10例復(fù)發(fā)性鼻息肉組織、10例慢性鼻竇炎組織和10例正常鼻黏膜組織的總RNA,合成cDNA,在標(biāo)準(zhǔn)96孔PCR反應(yīng)儀中進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn),用掃描儀掃描芯片熒光信號(hào),用

2、2-△△Ct計(jì)算JAK-STAT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路和NF-κΒ信號(hào)通路中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組對(duì)應(yīng)基因的表達(dá)差異。為了驗(yàn)證這些發(fā)現(xiàn)的可重復(fù)性,同時(shí)也為了檢驗(yàn)我們建立的實(shí)驗(yàn)體系的可靠性,我們嚴(yán)格按照第一次實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì),重復(fù)進(jìn)行了第二次實(shí)驗(yàn)。
　　 結(jié)果:兩次實(shí)驗(yàn)共得出與正常對(duì)照組比較上調(diào)2倍以上的差異基因14個(gè),其中JAK-STAT信號(hào)通路9個(gè)、MAPK信號(hào)通路2個(gè),NF-κΒ信號(hào)通路3個(gè)。在差異表達(dá)的基因中,主要包括信號(hào)轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)導(dǎo)

3、激活因子、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子、表皮生長(zhǎng)因子相關(guān)因子、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子、補(bǔ)體因子等。其中可能反映鼻息肉復(fù)發(fā)狀態(tài)的基因7個(gè);可能反映鼻息肉狀態(tài)的基因4個(gè);可能反映鼻黏膜炎癥狀態(tài)的基因1個(gè)。
　　 結(jié)論:用功能分類基因芯片篩選鼻息肉、復(fù)發(fā)性鼻息肉、慢性鼻竇炎和正常鼻黏膜組織間存在的差異基因是可行的,這將為尋找鼻息肉分類和預(yù)后評(píng)估的客觀實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)提供新的方法。
　　 第二章細(xì)胞周期蛋白D1.和抑瘤素M在復(fù)發(fā)性鼻息

4、肉組織中的表達(dá)及意義
　　 目的:檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和抑瘤素M(OncostatinM,OSM)蛋白在復(fù)發(fā)性鼻息肉、鼻息肉、慢性鼻竇炎及正常中鼻甲黏膜組織中的表達(dá)程度的差異,探討其在復(fù)發(fā)性鼻息肉發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法:采用蛋白質(zhì)印跡法分別檢測(cè)6例復(fù)發(fā)性鼻息肉、6例鼻息肉、6例慢性鼻竇炎及6例正常中鼻甲黏膜組織中Cyclin D1和OSM的蛋白表達(dá);免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)6例復(fù)發(fā)性鼻息肉、6例

5、鼻息肉、6例慢性鼻竇炎及6例正常中鼻甲黏膜組織中Cyclin D1蛋白的表達(dá)及定位,并比較表達(dá)程度的差異。
　　 結(jié)果:(1)免疫組化顯示Cyclin D1蛋白在復(fù)發(fā)性鼻息肉、鼻息肉、慢性鼻竇炎及正常中鼻甲黏膜組織中均有表達(dá),Cyclin D1蛋白主要位于鼻黏膜上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核,黃色或棕黃色染色為陽性。蛋白質(zhì)印跡顯示Cyclin D1蛋白和OSM蛋白在復(fù)發(fā)性鼻息肉、鼻息肉及慢性鼻竇炎組織中的表達(dá)均高于正常中鼻甲黏膜組