茶樹miRNA靶基因的鑒定及在低溫脅迫下的表達(dá)分析.pdf

1、分類號：單位代碼：10364密級：學(xué)號：13720271安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文茶樹miRNA靶基因的鑒定及在低溫脅迫下的表達(dá)分析IdentificationofmiRNAtargetgenesintea(Camelliasinensis)theirexpressionpatternsundercoldstress研究生：謝小芳指導(dǎo)教師：李葉云副教授合作指導(dǎo)教師：申請學(xué)位門類級別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)名稱：茶學(xué)研究方向：茶樹生物技術(shù)與種

2、質(zhì)資源所在學(xué)院：茶與食品科技學(xué)院答辯委員會主席：二零一六年五月I摘要低溫是茶樹常見的一種非生物脅迫，嚴(yán)重影響茶園的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培。micNAs(miRNAs)是一種小分子非編碼RNA，通過對靶基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控參與植物生長發(fā)育及抗逆境的調(diào)節(jié)。從miRNA靶基因的角度研究茶樹抗寒分子機(jī)制，對培育抗寒茶樹品種具有重要作用。本研究利用降解組測序技術(shù)鑒定了茶樹miRNA的靶基因，其中有8個靶基因通過RLM5’RACE實(shí)驗得到了驗證。用實(shí)時熒光定量法

3、（qRTPCR）分析了一部分低溫差異miRNAs的表達(dá)。結(jié)合低溫脅迫差異表達(dá)miRNAs及降解組測序結(jié)果，對部分低溫差異miRNAs及其靶基因進(jìn)行了表達(dá)模式分析。獲得的主要結(jié)果如下：（1）構(gòu)建了4℃低溫處理組和對照組兩個降解組測序文庫。降解組測序共發(fā)現(xiàn)了36個已知miRNA基因家族的316個靶基因和113個新miRNAs的246個靶基因。GO分析顯示它們參與了廣泛的細(xì)胞反應(yīng)和代謝過程。利用RLM5’RACE方法，驗證了7個miRNAs對

4、8個靶基因的剪切位點(diǎn)，結(jié)果顯示與降解組測序結(jié)果一致，表明降解組測序結(jié)果具有很高的準(zhǔn)確性。（2）基于課題組前期獲得的小RNA高通量測序及微列陣芯片的結(jié)果，篩選出27個低溫脅迫差異表達(dá)miRNAs，其中，有9個是新miRNAs。通過qRTPCR分析了6個miRNAs在低溫脅迫下的表達(dá)模式，qRTPCR結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。結(jié)合降解組測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，13個miRNAs對應(yīng)85個靶基因，這些靶基因大部分為轉(zhuǎn)錄因子，還包括酶和功能蛋白。其余14個

5、miRNAs在降解組中沒有找到對應(yīng)的靶基因。（3）qRTPCR研究了5對低溫差異表達(dá)miRNAs及其靶基因（miR156SPL、miR164NAC1、miR165REV、miR396GRF、miR6149APX）在4℃低溫脅迫下的表達(dá)模式。結(jié)果顯示這些miRNAs在低溫下均下調(diào)表達(dá)，而其靶基因均上調(diào)表達(dá)。此外，qRTPCR研究了miR164家族的2個成員和它們的靶基因NAC1在不同抗寒茶樹品種(龍井43、英紅9號)中的表達(dá)。vvimiR