EVn-50對人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長和凋亡作用的影響.pdf

1、目的
　　研究黃荊子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（RB細(xì)胞）生長作用以及誘導(dǎo)RB細(xì)胞凋亡作用，為開發(fā)和研制臨床治療人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤候選藥物提供實驗和理論依據(jù)。
　　方法
　　體外培養(yǎng)RB細(xì)胞；MTT比色法測定EVn-50對RB細(xì)胞增殖活性的影響；細(xì)胞計數(shù)法檢測RB細(xì)胞存活率，繪制生長曲線；軟瓊脂集落形成法測定EVn-50抑制體外培養(yǎng)RB細(xì)胞的錨定非依賴性生長作用；PI染色流式細(xì)胞術(shù)（F

2、CM）定量分析EVn-50誘導(dǎo)RB細(xì)胞凋亡程度；AO/EB染色熒光顯微鏡觀察EVn-50誘導(dǎo)RB細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；DNA瓊脂糖凝膠電泳確證EVn-50誘導(dǎo)RB細(xì)胞凋亡作用。
　　結(jié)果
　　MTT比色法測定結(jié)果顯示：EVn-50可作為黃荊子抗 RB的有效提取物。EVn-50對RB細(xì)胞增殖活性抑制作用強，并呈濃度依賴性，其IC50為9.60μg/ml；細(xì)胞計數(shù)結(jié)果表明：0.3、3.0、30.0μg/ml的EVn-50均具有抑

3、制RB細(xì)胞生長作用，呈濃度和時間依賴性；軟瓊脂集落形成法的結(jié)果表明：EVn-50對RB細(xì)胞錨定非依賴性生長具有明顯的抑制作用，并呈濃度依賴性。PI染色流式細(xì)胞術(shù)分析的量效實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：0.3、3.0、30.0μg/ml的EVn-50作用于RB細(xì)胞48小時后的細(xì)胞凋亡率分別是(2.4±0.1)％、(17.4±0.6)％、(40.7±0.7)%；而時效實驗中30.0μg/ml的EVn-50作用于RB細(xì)胞24、48、72小時后的細(xì)胞凋亡率分別

4、是(20.8±0.4)％、(40.7±0.7)％、(63.1±0.8)%；遠(yuǎn)高于空白對照組的凋亡率(0.8±0.3)%。表明：EVn-50誘導(dǎo)RB細(xì)胞凋亡，并呈濃度和時間依賴性。AO/EB染色熒光顯微鏡觀察EVn-50處理后，部分RB細(xì)胞呈現(xiàn)胞質(zhì)和胞核呈紅色，核固縮或碎裂的典型凋亡細(xì)胞形態(tài)特征。EVn-500.3μg/ml、3.0μg/ml、30.0μg/ml分別處理RB細(xì)胞48小時，以及EVn-5030.0μg/ml分別作用RB細(xì)胞0