DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因多態(tài)性對(duì)精子DNA完整性和原發(fā)性男性不育的影響.pdf

1、目的：探討DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因多態(tài)性（hOGG1 rs1052133；MUTYH rs3219489，rs10527342；ERCC5 rs17655；RNF8 rs2269058，rs761737）與精子DNA完整性和原發(fā)性男性不育之間的關(guān)系，并分析基因-基因、基因-環(huán)境交互作用對(duì)原發(fā)性男性不育的影響，以期闡明原發(fā)性男性不育的遺傳學(xué)病因。
　　方法：收集2011年8月至2012年12月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心門診確診的

2、原發(fā)性男性不育患者332例（其中原發(fā)性非梗阻性無精子癥87例、原發(fā)性少弱精癥166例、精液正常男性不育79例）作為病例組；收集同期在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院體檢，未借助輔助生殖技術(shù)、自然生育至少一個(gè)健康子女的生育男性329例為對(duì)照組。采集男性不育患者和對(duì)照組外周血2mL；采集男性不育患者和67例體檢并有正常生育史的男性精液一份。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（Polymerase Chain Reaction-Restriction

3、Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP）技術(shù)檢測以上6個(gè)SNP的基因型，運(yùn)用精子染色質(zhì)擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)（Sperm Chromatin Dispersion Test, SCD）檢測精子DNA完整性，并以DNA斷裂指數(shù)（DNA fragment index, DFI）表示。用t檢驗(yàn)分析病例組和對(duì)照組中精子DFI的差異，方差分析檢驗(yàn)原發(fā)性男性不育亞組和對(duì)照組精子DFI的差異以及病例組中6個(gè)SNP三種基因型攜帶者

4、間精子DFI的差異，用卡方檢驗(yàn)分析6個(gè)SNP基因型和等位基因頻率在原發(fā)性男性不育組和對(duì)照組中的分布差異，用Logistic回歸分析SNP與原發(fā)性男性不育的患病風(fēng)險(xiǎn)，用多因子降維法（MDR）分析基因-基因交互作用，采用單純病例研究分析基因-環(huán)境（吸煙和飲酒）交互作用。
　　結(jié)果：1.原發(fā)性男性不育患者精子DFI（46.2±22.3％）顯著高于對(duì)照組（21.4±9.2%）（P<0.05）；在病例組中，少弱精癥患者精子DFI（50.0±

5、22.1%）和精液正常男性不育患者精子DFI（38.2±20.7%）均高于對(duì)照組（21.4±9.2）%（P<0.05），并且少弱精癥組精子DFI高于精液正常男性不育組精子DFI（P<0.05）。
　　2. hOGG1 rs1052133（C→G）三種基因型在原發(fā)性男性不育組和對(duì)照組中的頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與CC型個(gè)體相比，攜帶CG、GG型的個(gè)體患原發(fā)性男性不育的風(fēng)險(xiǎn)降低（OR=0.54，95%CI=0.33-

6、0.89；OR=0.55，95%CI=0.33-0.91）；其余5個(gè)SNP與原發(fā)性男性不育無相關(guān)性。
　　3.病例組中，6個(gè)SNP與精子DFI無相關(guān)性（P>0.05）。
　　4.疾病亞組分層分析顯示：
　　1）hOGG1基因rs1052133（C→G）與原發(fā)性少弱精癥相關(guān)（P<0.05），而與原發(fā)性無精癥和精液正常男性不育無關(guān)（P>0.05）。與CC基因型個(gè)體相比，攜帶CG、GG基因型的個(gè)體患原發(fā)性少弱精癥的風(fēng)險(xiǎn)降低（

7、OR=0.40，95%CI=0.22-0.70；OR=0.52，95%CI=0.29-0.92）；
　　2）RNF8基因rs761737（T→C）三種基因型在無精癥組、少弱精癥組、精液正常男性不育組和對(duì)照組中的頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但在顯性遺傳模型下，精液正常男性不育組中，攜帶變異等位基因（CT+CC）個(gè)體的患病風(fēng)險(xiǎn)是TT型個(gè)體的0.52倍（P<0.05，OR=0.52，95%CI：0.28-0.97）；

8、>　　3）MUTYH基因rs3219489（G→C）三種基因型GG型、C G型和CC型，在精液正常男性不育組和對(duì)照組中的頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與GG型個(gè)體相比，攜帶CG型和CC型個(gè)體患精液正常男性不育的風(fēng)險(xiǎn)降低（OR=0.56，95%CI：0.33-0.95；OR=0.32，95%CI：0.13-0.81），同時(shí)，在顯性模型下，攜帶變異等位基因（CG+CC）個(gè)體的患病風(fēng)險(xiǎn)是GG型個(gè)體的0.50倍（P<0.05，OR=

9、0.50，95%CI：0.30-0.82）。G、C等位基因在兩組中的頻率分布差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，攜帶C等位基因的個(gè)體患精液正常男性不育的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶G等位基因個(gè)體的0.56倍（P<0.05，OR=0.56，95%CI：0.38-0.82）。
　　5.基因-基因交互作用分析顯示，DNA損傷修復(fù)相關(guān)的6個(gè)SNP間無交互作用。
　　6.基因-環(huán)境交互作用分析顯示，RNF8基因rs2269058與吸煙存在相乘交互作用，其余5個(gè)SNP與

10、吸煙、飲酒均不存在交互作用（P>0.05）。
　　結(jié)論：1.原發(fā)性男性不育患者精子DNA完整性降低，所研究的DNA損傷修復(fù)基因的6個(gè)SNP可能對(duì)精子DNA完整性沒有影響。
　　2. hOGG1基因rs1052133位點(diǎn)CG、GG基因型可能是原發(fā)性少弱精癥的保護(hù)性因素；MUTYH基因rs3219489位點(diǎn)C等位基因可能是精液正常男性不育的保護(hù)性因素。
　　3.在顯性遺傳模型下，RNF8基因rs761737位點(diǎn)CT+CC基