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文檔簡介
1、目的:觀察腎消通絡(luò)方對糖尿病腎病大鼠的防治作用,以TGF-β1/Smad信號通路為核心研究腎消通絡(luò)方的作用機制。
方法:選用清潔級、雄性SD大鼠50只,體重200±20g,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,隨機選取10只為對照組(A組Controlgroup),40只為造模組。采用1次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)方法制作糖尿病模型,72h后,尾靜脈取血測定造模組大鼠空腹血糖,高于16.7mmol/L者為成功糖尿病模型。對成功造模的大鼠進(jìn)行
2、完全隨機分組:模型組(B組Modelgroup)、厄貝沙坦組(C組Irbesartangroup)、中藥組(D組Shenxiaogroup)。次日起開始灌服給藥,中藥按生藥20g/kg·d,厄貝沙坦按25mg/kg·d,模型組和對照組灌服等量蒸餾水,1次/天,給藥共12周,自由飲食。12周末,尾靜脈取血測定大鼠空腹血糖;使用代謝籠留取24h尿,測定尿微量白蛋白(mA1b)含量;腹腔注射10%水合氯醛麻醉動物,腹主動脈取血,離心,留取血清
3、標(biāo)本,-20℃保存,檢測血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG);左側(cè)腎組織,4%多聚甲醛溶液固定,行HE、PAS染色,觀察腎臟病理改變,采用免疫組織化學(xué)法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)的表達(dá);右側(cè)腎組織皮質(zhì)部切取1mm3組織固定于電鏡液,電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)改變;右側(cè)腎組織其余部分液氮保存,采用RT-PCR測定腎組織中TGF-β1mRNA的表達(dá),采用Westernblo
4、t測定腎組織中Smad2/3、Smad7、結(jié)締組織生長因子(CTGF)、纖維粘連蛋白(FN)的表達(dá)。
結(jié)果:
1、腎消通絡(luò)方對DN大鼠血糖的影響
對照組血糖處于正常范圍內(nèi),模型組、厄貝沙坦組、中藥組血糖水平較對照組明顯升高(P<0.05),中藥組血糖水平有下降趨勢,但較模型組、厄貝沙坦組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
2、腎消通絡(luò)方對DN大鼠24hmA1b的影響
5、模型組、厄貝沙坦組、中藥組24hmA1b水平較對照組明顯升高(P<0.05),模型組較厄貝沙坦組、中藥組24hmA1b水平明顯升高(P<0.05),厄貝沙坦組、中藥組之間24hmA1b水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
3、腎消通絡(luò)方對DN大鼠腎功能的影響
模型組、厄貝沙坦組、中藥組Scr、BUN水平較對照組明顯升高(P<0.05),模型組較厄貝沙坦組、中藥組Scr、BUN水平明顯升高(P<0.05),厄
6、貝沙坦組、中藥組之間Scr、BUN水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
4、腎消通絡(luò)方對DN大鼠腎血脂的影響
模型組、厄貝沙坦組、中藥組TC水平較對照組明顯升高(P<0.05),模型組較厄貝沙坦組、中藥組TC水平明顯升高(P<0.05),厄貝沙坦組、中藥組之間TC水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。各組之間TG水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但中藥組TG水平有下降趨勢。
5、腎組織病理
7、形態(tài)學(xué)觀察
HE染色:對照組腎小球、腎小管形體結(jié)構(gòu)基本正常;模型組腎臟病理改變明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚,系膜細(xì)胞增生;厄貝沙坦組和中藥組較模型組病理改變減輕,兩組間差異不明顯。PAS染色:對照組腎小球形體結(jié)構(gòu)基本正常,PAS陽性物質(zhì)無明顯增多;模型組腎臟病理改變明顯,系膜區(qū)PAS陽性物質(zhì)增多,紅染明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚;厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,PAS陽性物質(zhì)較模型組有所
8、減少。電鏡觀察:對照組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)基本正常,厚度均勻,足突結(jié)構(gòu)正常,足細(xì)胞無調(diào)亡、脫落;模型組腎小球基底膜廣泛增厚,部分節(jié)段明顯,大量足突融合和缺失,部分足細(xì)胞丟失;厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,腎小球基底膜增厚不明顯,足突融合較少。
6、腎消通絡(luò)方對DN大鼠腎臟VCAM、TGF-β1表達(dá)的影響
對照組VCAM、TGF-β1在腎小球,腎小管處均有少量表達(dá);模型組、厄貝沙坦組、中藥組VCAM、TG
9、F-β1的表達(dá)水平較對照組明顯升高,模型組在腎小球內(nèi)可見VCAM、TGF-β1大量表達(dá),在內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞處均呈現(xiàn)表達(dá)增高,在細(xì)胞外基質(zhì)也有散在陽性表達(dá);厄貝沙坦組和中藥組VCAM、TGF-β1的表達(dá)水平較模型組有所降低,部分腎小球出現(xiàn)表達(dá)增高,整體水平較模型組呈現(xiàn)下調(diào),厄貝沙坦組和中藥組之間差異不明顯。
7、腎消通絡(luò)方對DN大鼠腎臟TGF-β1mRNA表達(dá)的影響
模型組、厄貝沙坦組、中藥組TGF-β1mR
10、NA水平較對照組明顯升高(P<0.05),模型組較厄貝沙坦組、中藥組TGF-β1mRNA水平明顯升高(P<0.05),厄貝沙坦組、中藥組之間TGF-β1mRNA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
8、腎消通絡(luò)方對DN大鼠腎臟Smad2/3、Smad7、CTGF、FN表達(dá)的影響
模型組Smad2/3水平較對照組、厄貝沙坦組、中藥組明顯升高(P<0.05),對照組、厄貝沙坦組、中藥組之間Smad2/3水平差異
11、無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。厄貝沙坦組、中藥組Smad7水平較對照組、模型組明顯升高(P<0.05),中藥組Smad7水平較厄貝沙坦組明顯升高(P<0.05),對照組、模型組之間Smad7水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。模型組、厄貝沙坦組、中藥組CTGF、FN水平較對照組明顯升高(P<0.05),模型組、中藥組CTGF、FN水平較厄貝沙坦組明顯升高(P<0.05),模型組CTGF、FN水平較中藥組明顯升高(P<0.05)。
12、> 結(jié)論:
1、腎消通絡(luò)方可以減少24hmA1b,降低Scr、BUN水平,具有保護(hù)腎功能的作用。
2、腎消通絡(luò)方可使TC水平降低,血糖、TG水平呈下降趨勢。
3、腎消通絡(luò)方能夠減輕腎臟病理損傷,對腎臟組織具有保護(hù)作用。
4、腎消通絡(luò)方能夠下調(diào)腎臟TGF-β1mRNA及TGF-β1的水平,降低Smad2/3的水平,提高Smad7的水平,對TGF-β1/Smad信號通路的抑制作用
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