厄貝沙坦藥物對(duì)健康人血漿MicroRNA表達(dá)譜的影響.pdf

1、一研究背景：
　　 MicroRNAs(miRNAs)具有廣泛的基因調(diào)節(jié)功能,涉及生命過(guò)程中包括早期胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡、甚至干細(xì)胞分化等一系列重要進(jìn)程,與生命體正常生理功能調(diào)控以及疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系。近年來(lái)隨著miRNAs在循環(huán)系統(tǒng)中被檢測(cè)出來(lái),循環(huán)miRNAs在臨床疾病診斷及藥物治療等方面的作用逐漸被關(guān)注。
　　 厄貝沙坦屬血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB),作為穩(wěn)定有效的降壓藥在高血壓治療中得

2、到廣泛應(yīng)用。目前ARB類(lèi)降壓藥對(duì)人血漿miRNAs表達(dá)影響的研究未見(jiàn)報(bào)道。
　　 二研究目的：
　　 1.建立人血漿miRNAs提取及定量檢測(cè)方法；選擇適用于心血管疾病研究血漿miRNAs相對(duì)定量檢測(cè)的內(nèi)參；驗(yàn)證長(zhǎng)期凍存人血漿miRNAs的穩(wěn)定性。
　　 2.分析連續(xù)口服厄貝沙坦前后健康人血漿miRNA表達(dá)譜,篩選出藥后表達(dá)差異的miRNAs。
　　 3.驗(yàn)證藥后健康人血漿表達(dá)差異的miRNAs并分析其與

3、藥物的關(guān)系。
　　 4.為尋找監(jiān)測(cè)ARB類(lèi)降壓藥治療效果的新生物標(biāo)記物探索新的研究方向。
　　 三研究?jī)?nèi)容及方法：
　　 1.應(yīng)用mirVana PARIS Kit(AM1556)提取試劑盒進(jìn)行血漿miRNAs提取,定量檢測(cè)采用TaqMan MicroRNA Assays qRT-PCR,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法,建立適用于本研究的提取檢測(cè)方法；同時(shí)通過(guò)比較健康人及心血管病人血漿候選內(nèi)參miRNAs表達(dá)穩(wěn)定性對(duì)心血管病相關(guān)研

4、究中人血漿miRNAs定量檢測(cè)的內(nèi)參進(jìn)行評(píng)價(jià),并從多方面驗(yàn)證人血漿miRNAs表達(dá)的穩(wěn)定性。
　　 2.16名健康男性漢族受試者分為兩組,每日口服厄貝沙坦150mg,連續(xù)7天,評(píng)價(jià)指標(biāo)包括:臨床觀(guān)察和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。同時(shí)應(yīng)用TaqMan Low-Density Arrays(TLDA)分析8名受試者血漿miRNA表達(dá)譜,并結(jié)合生物信息學(xué)miRNA功能性分析篩選表達(dá)差異的候選miRNAs。
　　 3.應(yīng)用TaqMan Mi

5、croRNA Assays qRT-PCR方法驗(yàn)證另外8名受試者血漿中差異miRNAs表達(dá)水平,并分析差異miRNAs與藥物降壓效果及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的關(guān)系。
　　 4.應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,組間差異檢驗(yàn)采用Wilcoxon test及Mann-Whitney test方法,相關(guān)性分析采用bivaiate相關(guān)分析,雙側(cè)檢驗(yàn),p<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 四研究結(jié)果：
　　 1.本研究通過(guò)

6、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法建立了穩(wěn)定可靠的血漿miRNAs提取和定量檢測(cè)方法,并驗(yàn)證了健康人血漿miRNAs表達(dá)的穩(wěn)定性。本研究證實(shí)候選內(nèi)參(U6,miR-16)在健康人和心血管病人血漿中表達(dá)無(wú)明顯差別。凍存2年內(nèi)血漿及提取后2周的血漿RNA仍可進(jìn)行準(zhǔn)確的miRNAs相對(duì)定量檢測(cè)。
　　 2.健康人服用厄貝沙坦后血漿miRNA表達(dá)譜發(fā)生改變,其中26個(gè)miRNAs表達(dá)顯著上調(diào),4個(gè)顯著下調(diào)；生物信息學(xué)功能分析確定14個(gè)可能與藥物作用相關(guān)的候選

7、差異miRNAs。
　　 3.驗(yàn)證14個(gè)差異表達(dá)候選miRNAs中6個(gè)表達(dá)水平上調(diào),6個(gè)表達(dá)水平下調(diào),2個(gè)無(wú)變化；其中血漿has-miR-25表達(dá)水平顯著上調(diào)2.36倍(P<0.05),同時(shí)has-miR-323—3p顯著下調(diào)2.02倍(P<0.05)且與藥后舒張壓下降相關(guān)；藥后表達(dá)差異的miRNAs與藥物代謝及藥物分布相關(guān)基因調(diào)控?zé)o關(guān)。
　　 五研究結(jié)論：
　　 1.U6和miR-16均適合做為人體血漿miRN