活血補腎湯對激素性股骨頭壞死VEGF及OPG-RANKL表達的影響.pdf

1、研究目的:
　　 本研究通過動物實驗的方法,從組織形態(tài)學(xué)和細胞分子水平,研究活血補腎湯對VEGF及OPG、RANKL的表達的影響,探討激素性股骨頭壞死的發(fā)病機制及活血補腎湯治療激素性股骨頭壞死的作用機制,為活血補腎湯的治則治法提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 1.活血補腎湯對兔激素性股骨頭壞死VEGF的影響
　　 1.1、將130只新西蘭大白兔分為5組:正常對照組、激素模型組、高(12.8

2、8g/kg·d)、中(9.66g/kg·d)、低(6.44g/kg·d)劑量活血補腎湯中藥治療組(造模按Matsui造模法)。正常對照組及激素模型組每日生理鹽水10ml灌胃。中藥治療組每日給予不同濃度的活血補腎湯中藥灌胃。連續(xù)給藥后,于第4、8、12周分批取材。
　　 1.2、顯微鏡下觀察各組兔股骨頭的組織形態(tài)并空骨陷窩記數(shù)。
　　 1.3、采用免疫組織化學(xué)SP法進行血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的測定。
　　 2

3、.活血補腎湯對兔激素性股骨頭壞死血清OPG/RANKL的影響。
　　 2.1、動物分組、造模、給藥同上。
　　 2.2、給藥4、8、12周時每組各取8只大白兔腹主動脈取血3ml,離心后收集血清,保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.3、采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測兔血清OPG、RANKL含量。
　　 3.活血補腎湯含藥血清對大鼠成骨細胞OPG/RANKLmRNA表達的影響。
　　 3.1、取新生SD大鼠

4、的顱蓋骨進行成骨細胞原代及傳代培養(yǎng)。取3代生長期成骨細胞,顯微鏡鏡下觀察進行成骨細胞鑒定。
　　 3.2、 SD大鼠12只,分為4組(生理鹽水對照組、高、中、低劑量活血補腎湯中藥組),每組3只。對照組大鼠3ml生理鹽水灌胃,高、中、低劑量中藥組大鼠按不同濃度3ml活血補腎湯灌胃,每天兩次,連續(xù)3天。各組于末次灌胃后2小時股動脈取血。離心后收集血清,保存?zhèn)溆谩?br>　　 3.3、大鼠成骨細胞分別置于含各組血清(濃度20％)的培

5、養(yǎng)基中,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　 3.4、 RT-PCR方法對各組成骨細胞的OPG、RASKLmRNA表達進行半定量檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1.HE觀察：
　　 激素模型組:骨小梁稀疏、結(jié)構(gòu)紊亂,骨髓細胞大量減少,骨髓多被脂肪細胞填充,骨細胞數(shù)量減少,空骨陷窩增多；中藥治療組在實驗期內(nèi)的骨小梁結(jié)構(gòu)基本完整。高、中劑量中藥組第8、12周骨小梁表面形成新的骨細胞和骨組織。
　　 2.VEGF的表達

6、。
　　 第4周時,高、中、低劑量中藥組及模型組VEGF表達明顯高于正常對照組(P<0.01)。中、低劑量組VEGF表達高于模型組(P<0.05)；第8周時,高、中、低劑量中藥組VEGF表達明顯高于模型組(P<0.01)；第12周時,高、中、低劑量中藥組VEGF表達明顯高于模型組(P<0.01)。
　　 3.OPG、RANKL血清含量。
　　 第4周:高、中、低劑量中藥組、正常對照組OPG含量均顯著高于模型組(P

7、<0.01)。第8周:模型組OPG含量顯著低于高、中、低劑量中藥組及正常對照組(P<0.01)。高、中、低劑量組明顯高于正常對照組(P<0.01).第12周:高、中、低劑量中藥組、正常對照組OPG含量均顯著高于模型組(P<0.01).模型組RASKL含量4、8、12周均顯著高于高、中、低劑量組及正常對照組(P<0.01)。
　　 4.成骨細胞OPG、RASKLmRNA表達值。
　　 高、中劑量中藥組OPGmRNA表達值高

8、于生理鹽水對照組(P<0.05)。高、中、低劑量組之間無明顯差異。RANKLmRNA表達值:高、中劑量中藥組明顯低于生理鹽水對照組(P<0.01)。低劑量中藥組低于生理鹽水對照組(P<0.05)。高劑量中藥組低于低劑量中藥組(P<0.05).
　　 結(jié)論：
　　 1.激素性股骨頭壞死局部VEGF的表達降低,抑制了血管與骨的再生。
　　 2.活血補腎湯能夠增強壞死股骨頭局部VEGF的表達。
　　 3.激素性