植物病毒金免疫層析試紙條的研制和應(yīng)用.pdf

1、本實驗是將免疫層析和金標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來，研究一種能夠快速、簡便、經(jīng)濟的方法來檢測植物病毒。用提純植物病毒免疫兔子和克隆病毒外殼蛋白基因然后原核表達，回收蛋白，再免疫兔子兩種方法制備了煙草花葉病毒、李屬壞死環(huán)斑病毒等病毒的抗體，所得多克隆抗體效價和特異性都比較理想。本實驗以煙草花葉病毒為主要模式病毒進行了系統(tǒng)研究。 所研制的煙草花葉病毒膠體金免疫層析試紙條，檢測試劑為噴涂在結(jié)合釋放墊即玻璃纖維上的膠體金標(biāo)記的兔抗TMV的多克隆抗體

2、，捕獲試劑為包被在硝酸纖維素膜上的兔抗TMV的多克隆抗體。用該試紙條檢測TMV的標(biāo)準(zhǔn)液時，檢測下限為50ng/ml。這一靈敏度達到了國外進口的試紙條檢測水平。交叉反應(yīng)試驗結(jié)果表明，該試紙條與PVX、ZYMV、WMV、PenMV、CYMV以及PNRSV等病毒均無交叉反應(yīng)。在特異性方面，該方法與ELISA方法進行了比較，結(jié)果顯示兩種方法的相符率達到98％。此外，本實驗也成功研制了馬鈴薯X病毒(PVX)、白草花葉病毒(PenMV)的檢測試紙條

3、，其檢測靈敏度分別為100ng/ml和200ng/ml，其都能達到實際應(yīng)用的效果。 本實驗也研究了煙草葉片中不同的成分，如DNA、RNA、葉綠素等對試紙條靈敏度的影響。結(jié)果表明煙草葉片中的成分對試紙條的檢測下限沒有影響；但極端bH值對試紙條的檢測靈敏度有很大影響。 該試紙條最大的優(yōu)點在于無需借助實驗室的設(shè)備，只需要取少量的植物汁液滴在試紙條上的樣品墊上，便可以在十五分鐘內(nèi)得到檢測結(jié)果，適合對一些檢疫性植物病毒當(dāng)場、即時地