中國林蛙皮膚膜活性多肽temporin-1CEa對三種乳腺癌細(xì)胞的作用研究.pdf

1、膜活性多肽(membrane-active peptides)是一種廣泛存在于生物體中的一類小分子生物活性肽，通常比較短，具有兩親性結(jié)構(gòu)，帶有正電，具有較好的抗菌活性和抗癌活性。其中具有抗癌作用的膜活性多肽可以選擇性地作用于癌細(xì)胞，對正常細(xì)胞損傷較小，對人體幾乎不具有毒性作用，且不易產(chǎn)生耐藥性，因此有望發(fā)展成為新型的抗癌藥物。兩棲類動物膜活性多肽一般均為疏水的、帶正電荷的并且以一種兩親性的α-螺旋的構(gòu)象存在，這種結(jié)構(gòu)可以促進與膜的相互作

2、用能力，通過對癌細(xì)胞膜、細(xì)胞骨架、線粒體、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)的入侵達到抗癌的作用效果。
　　 本實驗研究的膜活性多肽temporin-1CEa是從中國林蛙皮膚分泌物中提取獲得的，由17個氨基酸組成，其中含有9個疏水性氨基酸和7個親水性氨基酸，具有較好的兩親性；CD光譜結(jié)果顯示，temporin-1CEa在水溶液中呈無規(guī)則結(jié)構(gòu)，在50％TFE溶液中208和220nm處出現(xiàn)雙負(fù)吸收峰，經(jīng)計算其α-螺旋含量為87.59%，表明tempori

3、n-1CEa在脂膜中能形成α-螺旋構(gòu)象；MTT法檢測實驗表明temporin-1CEa對人乳腺癌MCF-7、Bcap-37、MDA-MB-231細(xì)胞具有較好的抑制作用，在60min時已發(fā)揮明顯的抗癌活性，與藥物作用濃度呈正相關(guān)但與作用時間幾乎沒有相關(guān)性，溶血實驗結(jié)果顯示，temporin-1CEa在有效抑癌濃度范圍內(nèi)對人紅細(xì)胞未見明顯的溶血作用。
　　 分別采用掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡對temporin-1CEa作用于三種

4、乳腺癌細(xì)胞后形態(tài)學(xué)的變化進行觀察，結(jié)果顯示隨著temporin-1CEa濃度的增加，乳腺癌細(xì)胞表面出現(xiàn)不同程度的凹陷，細(xì)胞膜微絨毛減少，同時出現(xiàn)不同程度的破損。
　　 通過激光掃描共聚焦顯微鏡觀察FITC標(biāo)記的temporin-1CEa在細(xì)胞中的作用部位，結(jié)果顯示從5min到60min之間，隨著時間的延長，temporin-1CEa從細(xì)胞膜逐漸進入到細(xì)胞內(nèi)部，并且隨濃度增加綠色熒光強度增強，說明temporin-1CEa首先在乳