人DNA聚合酶kappa的轉錄調控研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文人DNA聚合酶kappa的轉錄調控研究姓名：徐旸申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：胡汛鄭樹2003.5.1塑婆查蘭!!主蘭垡堡塞板插入配對堿基，造成1移碼突變。對某些損傷，pol1c不能進行TLS，包括順鉑加成物，胸腺嘧啶TT二聚體等，但是能有效延伸錯配的引物末端。pol1c能夠對B(a)P造成的DNA損傷進行TLS，在G對面插入c，準確跨越4種不同構象的dG_N2BPDE。盡管如此，大多數(shù)情況下polK主要產(chǎn)

2、生突變。pol1c在肺癌中高表達，提示pol，c與腫瘤發(fā)生的相關性。小鼠polK在睪丸組織中表達隨發(fā)育過程而變化，它的轉錄受AhR調控。有關polK在腫瘤中差異表達的機制還不清楚。通過本課題的研究，試圖闡明polK的轉錄調控機制，有助于我們深入了解p01c在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。1polK在腫瘤中的表達研究盡管已有研究表明polK在肺癌中表達增高，但它在其它腫瘤中的表達情況還不清楚。我們利用熒光實時定量PCR檢測了130對癌和癌旁正常組

3、織中pol1c的表達情況。在130對組織標本中，大腸癌占59例，胃癌48例，肺癌23例。先從組織中提取RNA，逆轉錄成cDNA，作為定量PCR的模板。比較每個標本的Ct值，并以GAPDH為內對照，進行統(tǒng)計學分析。與以前的結果不同，我們發(fā)現(xiàn)p01c在肺癌，大腸癌和胃癌組織中均表達降低，具有統(tǒng)計學意義(PO01)。23例肺癌中，有20例pol1c在癌中表達降低；59例大腸癌中50例比正常組織表達水平低；48例胃癌中44例pollc表達降低。

4、pol’c表達與患者年齡、性別、腫瘤病理類型和分期沒有明顯關系。Pol’c的差異表達的原因不清。促使我們對其轉錄調控機制開展研究。25’側翼區(qū)的克隆21首先我們進行了Pollc基因的轉錄起始點定位。采用5’eDNA末端快速擴增法(RACE)和套式PCR兩種方法。5’RACE利用Takara公司的試劑盒，從提取Hela細胞總RNA開始按說明操作。套式PCR是以人結腸組織cDNA文庫來源的7gtlIDNA為模板，進行2輪擴增。兩種方法得到的