林蛙油中農(nóng)藥的多殘留分析方法與抗衰老活性成分的研究.pdf

1、林蛙油是我國特有的名貴中藥材。本論文建立了林蛙油中農(nóng)藥殘留的分析方法，并且初步研究了林蛙油的抗衰老活性成分。 第一部分建立了林蛙油中農(nóng)藥多殘留的GC-MS/MS分析方法。 林蛙油成分復(fù)雜，基質(zhì)干擾嚴(yán)重。通過對凈化方法和檢測方法的優(yōu)化，本論文首次建立了林蛙油中農(nóng)藥多殘留的GC-MS/MS分析方法，用來分析有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類的農(nóng)藥共15種。樣品用乙酸乙酯提取、florisil層析柱凈化、乙酸乙酯淋洗后，

2、經(jīng)GC-MS/MS檢測，用外標(biāo)法進(jìn)行定量。這15種農(nóng)藥的濃度在0.050～10.00mg/L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)≥0.996。作0.05mg/kg、0.50mg/kg、2.00mg/kg三個(gè)水平的添加回收，平均加標(biāo)回收率為81％～117％，RSD為2.4％～18.2％。方法的檢測限在0.050mg/kg～2.00mg/kg范圍內(nèi)。此方法準(zhǔn)確、靈敏，適用于林蛙油中農(nóng)藥多殘留的分析。 第二部分研究了林蛙油抗衰老活性成分。

3、 本論文首次應(yīng)用了活性追蹤的方法來研究林蛙油的抗衰老活性成分。選用體外過氧化脂質(zhì)測定法作為抗衰老活性生物測定方法。通過研究生物測定實(shí)驗(yàn)條件(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟、肝勻漿液的濃度、過氧化反應(yīng)溫育時(shí)間)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，最終確定將3％的豬肝勻漿液溫育90min后，用硫代巴比妥酸沸水浴30min比色的方法測定過氧化脂質(zhì)的生成量。 分別用丙酮、乙酸乙酯、甲醇和生理鹽水提取林蛙油，測定各提取物的抗衰老活性，其中生理鹽水提取物的抗衰老活性最強(qiáng)

4、。研究生理鹽水提取物中活性成分的性質(zhì)。結(jié)果表明：其對熱穩(wěn)定、對酸不穩(wěn)定；不能通過醇沉、離心富集；含蛋白質(zhì)41％，含糖18.5％，推測活性成分為蛋白質(zhì)和多糖。又對蛋白質(zhì)部分進(jìn)行抗衰老活性追蹤。分別用硫酸銨沉淀、大孔樹脂柱吸附、葡聚糖凝膠分離蛋白質(zhì)，測定各部分的抗衰老活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，活性成分為大孔樹脂吸附物、蛋白質(zhì)和多糖。 凝膠電泳測定林蛙油所含十種蛋白質(zhì)的分子量，分別為：10.0kDa，12.9kDa，15.7kDa，32.1