螯蝦細(xì)胞內(nèi)吞相關(guān)因子功能鑒定及其應(yīng)用研究.pdf

1、對蝦白斑綜合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）是對蝦和螯蝦養(yǎng)殖業(yè)最具毀滅性的病原之一，能夠引起大規(guī)模病害暴發(fā)和高致死率，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。已報道，含纈酪肽蛋白做為內(nèi)吞和自噬的新標(biāo)志物在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮豐富的功能，包括泛素-蛋白酶體依賴的蛋白降解、膜融合、抗細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解、激活NF-κB和核酸修復(fù)等，并在poliovirus、hepatitis B virus、coronavirus

2、、Sindbis病毒的感染過程發(fā)揮一定作用。
　　因此，本文利用分子生物學(xué)研究方法探究紅螯螯蝦含纈酪肽蛋白在 WSSV感染過程發(fā)揮的作用，并通過1H NMR法檢測紅螯螯蝦感染 WSSV后組織代謝物變化，從代謝層面闡釋含纈酪肽蛋白在 WSSV感染過程發(fā)揮的作用，以期為病毒防治提供一種思路。本研究取得了如下成果：
　　1.利用5'和3' RACE技術(shù)克隆獲得紅螯螯蝦含纈酪肽蛋白（Cq-VCP）的cDNA，Cq-VCP開放閱讀框（

3、ORF）為2385 bp，共編碼794個氨基酸，具有保守的CDC48和AAA結(jié)構(gòu)域，Cq-VCP蛋白與其他物種的VCP蛋白具有較高的相似性。qPCR分析顯示，Cq-VCP在性腺、肉、血細(xì)胞和造血組織中的表達(dá)量較高。紅螯螯蝦感染W(wǎng)SSV6h后，造血組織中Cq-VCP的轉(zhuǎn)錄表達(dá)顯著上調(diào)，揭示Cq-VCP可能在紅螯螯蝦的免疫防御中發(fā)揮了重要作用。
　　2.利用 RNA干擾技術(shù)敲降 Cq-VCP基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)WSSV的轉(zhuǎn)錄及入胞均被抑制，

4、病毒感染Hpt細(xì)胞6h后共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)VCP與VP28共定位，表明VCP在WSSV入胞和復(fù)制過程中具有重要作用。
　　3.紅螯螯蝦感染W(wǎng)SSV1h和6h后，鰓組織的能量代謝和蛋白代謝增強(qiáng)，感染W(wǎng)SSV6h后，肝胰腺組織的能量代謝和脂質(zhì)代謝增強(qiáng)，表明病毒感染能夠引起宿主能量代謝增強(qiáng)，這種變化有利于病毒成功地實施感染。而VCP具有水解ATP供能的作用，這也就從另一方面解釋VCP在病毒感染過程發(fā)揮的作用。
　　綜上，本論文初步探究