RNAi沉默Survivin基因?qū)Π螂装┘?xì)胞增殖和調(diào)亡作用的體外研究.pdf

1、目的:初步探討用RNAi沉默survivin基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞增殖和調(diào)亡的影響。 方法:擴(kuò)增并鑒定重組質(zhì)粒：實(shí)驗(yàn)分為空白對照組，陰性對照組和實(shí)驗(yàn)組，將重組質(zhì)粒(pTZU6+1-shRNA-survivin)、陰性質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至膀胱癌T24細(xì)胞，用RT-PCR檢測T24細(xì)胞survivin基因表達(dá)的變化；用MTT法觀察T24細(xì)胞增殖抑制率；用AO/EB熒光染色檢測和膜聯(lián)蛋白V-PI(annexinV/PI)染色流式細(xì)胞技術(shù)檢測

2、T24細(xì)胞調(diào)亡的情況；用透射電鏡觀察T24細(xì)胞形態(tài)的改變。 結(jié)果:酶切及測序鑒定結(jié)果表明：重組質(zhì)粒目的片段插入正確；RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示：轉(zhuǎn)染pTZU6+1-shRNA-survivin 24h后，實(shí)驗(yàn)組T24細(xì)胞survivin基因的表達(dá)受到顯著抑制，抑制率為41.77％，與陰性對照組相比有差異顯著性，(P<0.05)；MTT實(shí)驗(yàn)顯示：轉(zhuǎn)染48h后，實(shí)驗(yàn)組T24細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到最高，為52.53％，與空白對照組及陰性對照組相

3、比有差異顯著性，(P<0.05)；annexinV/PI染色法流式細(xì)胞術(shù)顯示：轉(zhuǎn)染24h后，實(shí)驗(yàn)組T24細(xì)胞凋亡率為(16.76±1.31)％，與空白對照組及陰性對照組相比有差異顯著性，(P<0.05)；轉(zhuǎn)染24h后，實(shí)驗(yàn)組透射電鏡觀察可見各期凋亡細(xì)胞及凋亡小體，陰性對照組無明顯改變。 結(jié)論:轉(zhuǎn)染pTZU6+1-shRNA-survivin可以顯著下調(diào)survivin基因的表達(dá)，并可以顯著抑制T24細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其自發(fā)凋亡。RN