RNAi技術(shù)沉寂Survivin基因表達及體外誘導(dǎo)人膽管癌細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文RNAi技術(shù)沉寂Survivin基因表達及體外誘導(dǎo)人膽管癌細胞凋亡的實驗研究姓名：左克強申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：鄭啟昌20060401，●j—f，ob攀咖晴侖丈基因在膽管癌發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后中作用的研究報道極少。l心陡干擾是生物體保持其自身遺傳性狀的穩(wěn)定和調(diào)控后生型突變的～種生理現(xiàn)象作為一種古老的保護機制，RNAj不僅可以抵御外源有害基因入侵，而且將其作為一種解讀基因功能的研究技術(shù)還可能為功能基因

2、組學(xué)、基因治療學(xué)等眾多領(lǐng)域帶來新的突破。因此，鼢隊干擾在理論上有望成為—種新的腫瘤基因治療方案。本研究若能證實survivm基因在膽管癌的發(fā)生發(fā)展和判斷預(yù)后方面有重要的作用，我們將設(shè)計以survivm基因為靶標(biāo)的shRN氣試探survivinshRNA對人膽管癌細胞體外增殖及凋亡的影響，通過沉寂survivm基因的表達，研究survi—vin在抗凋亡信號通路中相關(guān)信號分子的變化情況，從而為膽管癌的基因治療提供新的理論基礎(chǔ)。第一部分Sur

3、vivin在人膽管癌組織及膽管癌細胞系中的表達和意義一Survivin在人膽管癌組織及膽管癌細胞系中選擇性高表達目的探討survivm基因在人膽管癌組織及膽管癌細胞系中的表達情況，初步闡明survivm基因與膽管癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。方法我們收集了48例人膽管癌組織及相應(yīng)的癌旁正常組織標(biāo)本。采用RTPCR，westernblot方法分別在mRNA和蛋白水平檢測了survivm表達情況。在上述基礎(chǔ)上，我們用survivin的特異性抗體對所

4、有組織標(biāo)本進行了免疫組織化學(xué)分析。最后，我們選用人膽管癌細胞系QBC939，采用RTPCR，west鋤blot方法分別mRNA和蛋白水平檢測了survivm表達情況，并以非腫瘤細胞系HT1080作為對照。結(jié)果RTPCR，westernblot結(jié)果發(fā)現(xiàn)667％的病人(32例)的癌組織中特異性高表達，而癌旁正常組織中未能檢測到smvivin表達，而且二者有高度相關(guān)性。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在上述RTPCR，westernblot陽性的癌組織