艾地普林及其代謝物的抗菌活性研究.pdf

1、艾地普林屬于二氨基嘧啶類藥物，主要通過抑制二氫葉酸還原酶的活性抑制四氫葉酸的合成，從而影響細(xì)菌的葉酸代謝。與同類藥物甲氧芐啶相比，艾地普林的半衰期長，表觀分布容積大，且低毒、安全，無致突變性，具有良好的應(yīng)用前景。然而，艾地普林藥效學(xué)方面的研究較少，且沒有對其代謝物的抗菌活性進行過研究。本課題立足本實驗室前期關(guān)于艾地普林合成工藝及殘留消除等研究成果，測定了艾地普林對多種動物源細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC），并對 MI

2、C50、MIC90、MBC50和 MBC90進行統(tǒng)計，初步制定了抗菌譜；測定了艾地普林主要代謝物，即N-單脫甲基-ADP（ADP1）、N-雙脫甲基-ADP（ADP2）和3`-羥基-ADP（ADP3）對其中兩種敏感菌即豬源鏈球菌和雞源沙門氏菌的抗菌活性；選取豬源鏈球菌，進行艾地普林對豬鏈球菌病的II期臨床治療試驗。本研究的完成旨在補充艾地普林藥效學(xué)相關(guān)資料，為該藥的進一步推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　1艾地普林的體外抗菌活性
　

3、　根據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）所制定的抗菌藥物敏感性試驗執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，以甲氧芐啶為對照藥，測定了艾地普林對豬、雞、魚、牛和羊源常見致病菌的MIC和 MBC。由于體內(nèi)病原菌基本處于缺氧甚至無氧的環(huán)境，因此同時測定了有氧條件下和厭氧條件下艾地普林對兼性厭氧菌的抗菌作用，并進行了對比。抑菌效果相關(guān)參數(shù)表明，艾地普林的抗菌譜與甲氧芐啶相同，對大多數(shù)的革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有較好的抑制作用，為廣譜型抗菌藥物。
　　對艾地普林較

4、敏感的細(xì)菌包括豬源沙門氏菌和鏈球菌，雞源大腸桿菌和沙門氏菌，牛源大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌和巴氏桿菌，羊源的鏈球菌、曼氏桿菌,魚源的大腸桿菌、柱狀黃桿菌、鮑曼不動桿菌和魯克氏耶爾森菌；中度敏感菌包括副豬嗜血桿菌，牛源和羊源克雷伯氏菌，魚源金黃色葡萄球菌、腸型點狀氣假單胞菌、結(jié)核分枝桿菌、無乳鏈球菌；耐藥菌包括豬源大腸桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌，雞源金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和牛源的金黃色葡萄球菌。艾

5、地普林對所測敏感菌和中度敏感菌的MBC/MIC在1-4之間，顯示了較好的殺菌活性。
　　在艾地普林的敏感菌和中度敏感菌中，艾地普林與甲氧芐啶對所測大部分病原菌的MIC和MBC相等或相差一個梯度。其中，兩者對豬源大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌，魚源柱狀黃桿菌的抗菌活性相當(dāng)；艾地普林對雞源沙門氏菌，牛源和羊源的曼氏桿菌、鏈球菌、巴氏桿菌，魚源的大腸桿菌、鮑曼不動桿菌、魯克氏耶爾森菌、腸型點狀氣假單胞菌、金黃色葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌和無乳鏈

6、球菌的活性較甲氧芐啶稍強；對雞源和牛源大腸桿菌的抗菌活性稍弱。
　　從單個菌株比較，厭氧條件下艾地普林對所測兼性厭氧菌的MIC值和MBC值與有氧條件下相等或相差一個梯度；從每種菌的多株細(xì)菌的MIC50、MBC50、MIC90、MBC90的統(tǒng)計結(jié)果比較，有氧條件和厭氧條件的這些值均相等，即在有氧條件下和厭氧條件下艾地普林對兼性厭氧菌的抗菌活性無明顯的差別，均具有較好的抑菌活性和殺菌活性。因此，該藥無明顯厭氧選擇活性。
　　2艾

7、地普林主要代謝物的體外抗菌活性
　　通過艾地普林的體外抗菌活性研究，選取了44株豬源鏈球菌和40株雞源沙門氏菌，測定艾地普林主要代謝物，即ADP1、ADP2和ADP3對這兩種細(xì)菌的MIC和MBC。結(jié)果表明 ADP3對所測定的44株豬源鏈球菌和40株雞源沙門氏菌的MIC和 MBC均大于128μg/mL，沒有抗菌活性。整體來說，ADP1、ADP2和艾地普林三者對所測豬源鏈球菌和雞源沙門氏菌的MIC50、MBC50、MBC50/MIC5

8、0、MIC90、MBC90和 MBC90/MIC90都相等。其中，對豬源鏈球菌的MIC50為2μg/mL，MBC50為4μg/mL， MBC50/MIC50為2；MIC90為32μg/mL， MBC90為64μg/mL， MBC90/MIC90=2。對雞源沙門氏菌 MIC50為2μg/mL， MBC50為4μg/mL， MBC50/MIC50等于2；MIC90為32μg/mL，MBC90為64μg/mL，MBC90/MIC90等于2。因

9、此，ADP1和 ADP2的抗菌活性與艾地普林相當(dāng)，均具有較強的抑菌活性和殺菌活性。
　　3艾地普林對豬鏈球菌病的治療試驗
　　將60頭體重11-13 kg的斷奶仔豬隨機分成6組，每組10頭。除空白對照組不攻毒也不給藥外，其他各組均皮下注射制備好的1010 CFU的鏈球菌 CVCC607。豬鏈球菌疾病模型構(gòu)建成功后，陰性對照組不給藥，藥物對照組以30 mg/kg b.w.的劑量肌肉注射復(fù)方磺胺嘧啶鈉，其他三個組分別以10 mg

10、/kg b.w.、20 mg/kg b.w.和40 mg/kg b.w.的劑量肌肉注射艾地普林，并對應(yīng)命名為低劑量組、中劑量和高劑量組。各治療組連續(xù)給藥五天，每天給藥兩次，給藥結(jié)束后觀察15天。在整個試驗過程中，對各豬只的精神狀態(tài)、體溫、臨床癥狀進行檢測，并根據(jù)評分系統(tǒng)進行評分。最后根據(jù)各組的死亡率、有效率、治愈率、相對增重率來對治療效果進行評判。
　　給藥治療后，不同組的發(fā)病動物的恢復(fù)情況不同。陰性對照組平均癥狀得分在給藥后的第

11、五天開始下降，第十五天時恢復(fù)正常，但個別豬只依然出現(xiàn)精神沉郁和咳嗽癥狀；平均直腸溫度在給藥后的第六天后開始出現(xiàn)明顯下降，第九天時恢復(fù)至39.5℃以下。艾地普林高劑量組的豬只體溫在第二天即回復(fù)正常，平均癥狀得分下降至2分以下，從第三天開始直至試驗結(jié)束均維持在0分；中劑量組豬只的平均體溫在第二天降至正常，癥狀分?jǐn)?shù)在第三天恢復(fù)正常；低劑量組的體溫和平均每頭豬的癥狀分?jǐn)?shù)分別在第三天和第四天恢復(fù)正常，所有治愈豬只在觀察期內(nèi)均無復(fù)發(fā)。
　　在

12、試驗前和試驗結(jié)束后對各組豬只稱重并進行對比。藥物對照組的相對增重率介于高劑量組和中劑量組之間，分別為93.0％、96.5%和91%，三者的相對增重率無顯著差異(P＞0.05)；低劑量組的相對增重率為74.7%，與高劑量組和中劑量組相比有顯著差異(P＜0.05)；而陰性對照組的凈增重僅為1.77㎏，相對增重率為34.5%，與高劑量組、中劑量和低劑量組相比較低，呈顯著性差異(P＜0.05)。
　　綜合分析咳嗽、精神狀態(tài)、體溫等癥狀，計

13、算艾地普林對豬鏈球菌病的治療效果。陰性對照組的存活率為70%，高劑量組、中劑量組和低劑量組均無死亡豬只出現(xiàn)，存活率為100%。其中，高劑量組可達(dá)到100%的有效率和100%的治愈率，中劑量組的有效率和治愈率也均為90%，而低劑量組的有效率為80%，治愈率為70%，說明艾地普林各劑量組均可達(dá)到較好的治療效果。由此可得出艾地普林的推薦劑量為20-40mg/kg b.w.，建議以20-40mg/kg b.w.的劑量對癥狀比較明顯的豬只進行治療