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1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文雷帕霉素對體外培養(yǎng)的兔晶體上皮細(xì)胞增殖的影響姓名:趙杰申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):眼科學(xué)指導(dǎo)教師:蔡可麗20050420山東大學(xué)碩士學(xué)位論文雷帕霉素對體外培養(yǎng)的兔晶體上皮細(xì)胞增殖的影響研究生趙杰導(dǎo)師蔡可麗教授專業(yè)眼科學(xué)中文摘要目的雷帕霉素是一種新型的大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑,近年來被廣泛運(yùn)用于器官移植、惡性腫瘤治療、預(yù)防冠狀動(dòng)脈狹窄等,眼科已有研究應(yīng)用于動(dòng)物的角膜移植。后發(fā)性自內(nèi)障是自內(nèi)障術(shù)后最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一,其原因是由于
2、白內(nèi)障術(shù)后殘留的晶體上皮細(xì)胞增殖、移行、轉(zhuǎn)化,從而在后囊膜上形成纖維膜,嚴(yán)重影響術(shù)后視力的恢復(fù)。本研究在體外培養(yǎng)兔晶體上皮細(xì)胞的基礎(chǔ)之上,旨在研究兔晶體細(xì)胞的體外生長特性,觀察不同濃度雷帕霉素對晶體上皮細(xì)胞形態(tài)、增殖等生物學(xué)活性的影響,并對其可能的作用機(jī)制加以初步探討,為臨床闡明后囊混濁的發(fā)病機(jī)理和探討防治措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法晶體上皮細(xì)胞來自健康成年兔(15kg2okg)的晶體囊膜,將其放入DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),達(dá)匯合點(diǎn)后細(xì)胞傳代,第
3、23代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。(1)用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行兔晶體上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng),光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。(2)將23代兔晶體上皮細(xì)胞以5104個(gè)/ml接種于96孔板,244時(shí)后分別加入雷帕霉素(0ng/nd,5ng/ml,10ng/ml20ng/ml,40ng/ml,SOng/m1)。加藥后于培養(yǎng)24d“時(shí)后,光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),以MTT法測細(xì)胞增殖活性。(3)將23代兔晶體上皮細(xì)胞以5104個(gè)/ml接種于鋪有玻片的6孔板中,24小時(shí)后分別加入雷帕
4、霉素(0ng/ml,5ng/ml,lOng/ml,20ng/ml,40ng/ml,sOng/nd)。加藥后于培養(yǎng)24d“時(shí)后,光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),取出細(xì)胞爬片,行髓染色,并以免疫組化sP法對PcNA進(jìn)行檢測。“)取雷帕霉素(0ng/“20ng/m1)處理過的兔晶體上皮細(xì)胞各106爪,以流式細(xì)胞儀測細(xì)胞周期。(5)取雷帕霉素(0rig/rid,5ng/ml,lOng/ml20ng/ml,40ns/ml,80nrdml)處理過的兔晶體上皮細(xì)
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