腦缺血再灌注損傷中c-Jun表達以及GA對其調控的分子機制.pdf

1、目的：本實驗室的前期研究結果顯示，兩類鈣通道拮抗劑抑制大鼠海馬CA1區(qū)腦缺血后轉錄因子c-Jun的表達，c-Jun在大鼠海馬CA1區(qū)神經元損傷中發(fā)揮著重要的作用。在此基礎上，我們進一步探討大鼠海馬CA1區(qū)c-Jun激活與抑制的分子機制。
　　方法：采用SD大鼠四動脈結扎全腦缺血模型，應用免疫印跡首先檢測c-Jun在腦缺血/再灌注中的變化并觀察N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartateNMDA)受體的拮抗劑MK

2、801、L-型電壓門控鈣通道(L-type voltage gated calciumchannels L-VGCC)受體的拮抗劑Nifedipine、紅藻氨酸(Kainic acid KA)受體的抑制劑NS102、a-氨基-3-羧基-5-甲基-4-異噁唑丙酸(a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-proprionic acid AMPA)受體的抑制劑GYKI-52466及細胞內鈣離子螯合劑BAP

3、TA-AM和轉錄因子CAMP應答元件結合蛋白(calcium/calmodulin dependentprotein kinase CREB)對腦缺血/再灌注誘導的c-Jun活性的影響，采用RT-PCR研究CREB對c-Jun mRNA水平的影響，免疫印記、免疫沉淀研究c-Jun與熱休克蛋白90(90-kDa heat shock protein Hsp90)的關系以及Hsp90的抑制劑格爾德霉素(geldanamyein GA)對c-

4、Jun表達的影響，通過免疫沉淀的方法檢測其泛素化水平的變化，最后通過形態(tài)學觀察MK801、Nifedipine、BAPTA-AM、KN93、CREB反義寡核苷酸(CREB AS-ODNs)和GA對神經元損傷的保護作用。
　　結果：1.腦缺血/再灌注中，c-Jun表達增高；MK801、Nifedipine和BAPTA-AM、KN93、CREB AS-ODNs能夠抑制c-Jun的表達和活化。2.在腦缺血再灌注后c-Jun與Hsp90形

5、式免疫復合物，GA可通過抑制復合物的形成而使c-Jun表達降低。3.MG132阻斷GA促進的經由泛素-蛋白酶體途徑的降解c-Jun。4.焦油紫染色結果表明抑制c-Jun表達具有抗腦缺血再灌注損傷誘導的海馬神經元遲發(fā)型死亡的作用。
　　結論：1.腦缺血再灌注損傷中，c-Jun經由Ca2+-CaMK-CREB信號通路表達增高。2.GA通過抑制Hsp90的分子伴侶活性，使其客戶蛋白c-Jun穩(wěn)定性降低發(fā)生經由泛素-蛋白酶體途徑降解，這種