腎臟缺血再灌注期間乙醛脫氫酶2的表達(dá)變化以及miR-146a對(duì)其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：
　　器官移植的缺血過(guò)程不可避免，再灌注又會(huì)給器官帶來(lái)的二次損傷，這是各種臨床治療方法的矛盾所在，其復(fù)雜的發(fā)生機(jī)制使其進(jìn)一步研究處于瓶頸。ALDH2是目前發(fā)現(xiàn)的在人體中具有重要作用的一種酶，其在多種器官I(mǎi)R中的保護(hù)作用已被證實(shí)。而在腎臟IR中的作用有待證實(shí)。另有研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a可通過(guò)對(duì)ALDH2的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，在心臟、小腸的 IR損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。因此，我們希望通過(guò)本實(shí)驗(yàn)初步探討ALDH2在腎臟IR中的作用，以及m

2、iR-146a對(duì)ALDH2的調(diào)控作用及其可能的調(diào)控機(jī)制。為進(jìn)一步研究ALDH2在腎臟I/R中的作用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　第一部分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，采用雄性C57BL/6J（H-2Kb）小鼠，8-10周齡，夾閉雙腎腎蒂30min制作缺血再灌注損傷模型，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)下腔靜脈取血及雙腎，HE染色觀察腎臟病理?yè)p傷情況，檢測(cè)血液肌酐水平，RT-PCR檢測(cè)ALDH2及miR-146a表達(dá)，Western Blot檢測(cè)ALDH2蛋白表達(dá)

3、。
　　第二部分為體外實(shí)驗(yàn)，采用雄性C57BL/6J（H-2Kb）小鼠，8-10周齡。分離提純小鼠腎小管上皮細(xì)胞及腹腔巨噬細(xì)胞，石蠟油法模擬I/R損傷，10uM H2O2模擬氧化應(yīng)激狀態(tài)，各時(shí)間點(diǎn)Trizol法提取細(xì)胞RNA，RT-PCR檢測(cè)ALDH2及miR-146a表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　小鼠腎臟熱缺血IR后3h，ALDH2表達(dá)迅速上調(diào)，隨后逐漸下降，IR后12h恢復(fù)到接近假手術(shù)組水平。miR-146a在IR后3小

4、時(shí)表達(dá)顯著升高，隨后上調(diào)幅度逐漸縮小，至IR后72小時(shí)，miR-146a表達(dá)仍為對(duì)照組的3.7±0.7倍。腎臟缺血再灌注后1h，ALDH2蛋白迅速減少，并于3h降至最低，隨后逐漸升高，12h蛋白水平仍明顯低于對(duì)照組，24h達(dá)到頂峰后逐漸下降。與假手術(shù)組相比，IR1h、3h、6h、12h組ALDH-2蛋白表達(dá)顯著減少（P<0.01或P<0.001）；IR24h、72h組ALDH-2蛋白表達(dá)顯著增加（P<0.001）。
　　TEC：I

5、R后3h，ALDH-2表達(dá)顯著升高，隨后逐漸降低，刺激后24小時(shí)ALDH-2表達(dá)仍顯著高于對(duì)照組；IR后3h，miR-146a表達(dá)顯著降低；隨后逐漸升高，刺激后24小時(shí)miR-146a表達(dá)顯著升高，約為對(duì)照組的4.2±0.8倍；H2O2刺激后3h， ALDH-2表達(dá)顯著升高，隨后逐漸降低，刺激后24小時(shí)ALDH-2表達(dá)仍顯著高于對(duì)照組；H2O2刺激后6h內(nèi)， miR-146a表達(dá)無(wú)明顯變化，刺激后24小時(shí)miR-146a表達(dá)顯著升高，約

6、為對(duì)照組的2.7±0.7倍。
　　MΦ：IR后3h ALDH-2表達(dá)水平即顯著升高，刺激后24小時(shí)ALDH-2表達(dá)約為對(duì)照組的4.2±0.8倍;IR后，原代MΦ的miR-146a表達(dá)水平無(wú)顯著變化;H2O2刺激后6h，ALDH-2表達(dá)水平顯著升高，刺激后24小時(shí)約為對(duì)照組的5.2±0.9倍;H2O2刺激后3h， miR-146a表達(dá)即開(kāi)始上調(diào)，刺激后24小時(shí)miR-146a表達(dá)約為對(duì)照組的5.7±1.2倍。
　　結(jié)論：