纈沙坦和血管緊張素Ⅱ?qū)Τ扇斯跔顒?dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞NOS活力和NO含量的影響.pdf

1、目的:建立成人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型；研究纈沙坦(valsartan)和/或血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對(duì)體外培養(yǎng)的成人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶(NOS)活力以及一氧化氮(NO)含量的影響。 方法:對(duì)急死成人左冠狀動(dòng)脈前降支采用膠原酶消化法結(jié)合機(jī)械法獲得內(nèi)皮細(xì)胞，用含胎牛血清(FBS)的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)液(DMEM)培養(yǎng)細(xì)胞并傳代，將第二代傳代細(xì)胞分成兩部分，一部分凍存?zhèn)溆?，另一部分通過(guò)倒置相差顯微鏡觀

2、察細(xì)胞形態(tài)、透射電鏡查找Weibel-Palade小體(Weibel-Paladebodys，WPBs)、免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Ⅷ因子相關(guān)抗原(factorⅧrelatedantigen，Ⅷ-RAg)的方法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；復(fù)蘇上述凍存的細(xì)胞，并將其接種于5ml大小的培養(yǎng)瓶中，將細(xì)胞分為6組，即對(duì)照組、AngⅡ(濃度為10μmol/L)組、纈沙坦(濃度為10μmol/L)組和AngⅡ(濃度為10μmol/L)加3種不同濃度(0.1、1.

3、0、10μmol/L)纈沙坦組，當(dāng)?shù)谌鷤鞔?xì)胞生長(zhǎng)達(dá)培養(yǎng)瓶表面的60％時(shí)加入藥物，后3組需先加入纈沙坦預(yù)作用半小時(shí)，再加入AngⅡ，培養(yǎng)36小時(shí)后檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞NOS沾力及NO含量。 結(jié)果:細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定結(jié)果：原代培養(yǎng)的細(xì)胞24小時(shí)貼壁率為30％-40％，培養(yǎng)2天后鏡下見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，培養(yǎng)第5天細(xì)胞數(shù)量明顯增加，可達(dá)培養(yǎng)表面的40％左右，細(xì)胞突起縮短，胞體緊密相連，培養(yǎng)第7天，光鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈大片克隆狀，細(xì)胞間界限不清。第10天

4、，血管內(nèi)皮細(xì)胞基本呈單層狀，緊密排列。傳代培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)為多角形，邊界清楚，生長(zhǎng)活躍，符合血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)特性。透射電鏡觀察，胞質(zhì)內(nèi)含內(nèi)皮細(xì)胞特有的細(xì)胞器WPBs；兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色陽(yáng)性，證明培養(yǎng)的細(xì)胞含有Ⅷ-RAg。藥物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：NOS活力在各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=407.747，P=0.000)；NO含量在各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=258.918，P=0.000)；AngⅡ組的NOS活力和NO含量明顯低于

5、對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；NOS活力和NO含量在纈沙坦組和對(duì)照組之間的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均大于0.05)；AngⅡ組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+0.1μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；AngⅡ組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+1μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；AngⅡ組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+10μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、(P值均為0.000)；AngⅡ+0.1μmol/L纈沙坦組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+1μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；AngⅡ+1μmol/L纈沙坦組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+10μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)。 結(jié)論：1本研究所培養(yǎng)細(xì)胞為成人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。 2單獨(dú)應(yīng)用血管緊張素Ⅱ能降低成人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶活力并抑制一氧化氮合成