L-選擇蛋白與P388D1淋巴瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的相關(guān)性.pdf

1、本文的主要工作： 一、L-選擇蛋白抗體阻抑小鼠淋巴瘤P388D1細(xì)胞經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的潛能 L-選擇蛋白參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。天然淋巴細(xì)胞向末梢淋巴結(jié)歸巢需要L-選擇蛋白的參與。本文擬探討巨噬細(xì)胞樣淋巴瘤細(xì)胞株P(guān)388D1L-選擇蛋白參與其向淋巴道轉(zhuǎn)移的作用，采用了流式細(xì)胞技術(shù)、RT-PCR及免疫熒光技術(shù)分析P388D1細(xì)胞L-選擇蛋白的表達(dá)。進(jìn)而通過體外淋巴結(jié)黏附實(shí)驗(yàn)、歸巢實(shí)驗(yàn)及整體實(shí)驗(yàn)分析L-選擇蛋白是否參與淋巴道轉(zhuǎn)移，結(jié)

2、果表明： 1.流式細(xì)胞技術(shù)和RT-PCR檢測均證明P388D1細(xì)胞表達(dá)L-選擇蛋白。免疫熒光分析結(jié)果顯示L-選擇蛋白存在與P388D1細(xì)胞膜上。 2.淋巴結(jié)體外黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果：P388D1細(xì)胞能夠容易地黏附到淋巴結(jié)上，其黏附位置為淋巴竇和邊緣竇。用MEL-14孵育P388D1細(xì)胞后的數(shù)據(jù)顯示：P388D1細(xì)胞向淋巴竇和邊緣竇上黏附可以被MEL-14阻斷。 3.擬闡明MEL-14在抑制P388D1細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移的潛能

3、，作者等采用歸巢實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果。將P388D1用CFSE標(biāo)記后注射到小鼠足墊，分析P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)移。 4.擬探討MEL-14抑制P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的長期作用，作者等采用了整體實(shí)驗(yàn)觀察其抑制轉(zhuǎn)移情況。 二、SiRNA轉(zhuǎn)染沉寂小鼠淋巴瘤P388D1細(xì)胞L-選擇蛋白表達(dá)及其經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的潛能 RNA干擾是基因功能、基因治療、藥物篩選、抗病毒及抗腫瘤等研究的有效工具。 1.流式細(xì)胞技術(shù)、RT

4、-PCR檢測和免疫熒光分析均證明轉(zhuǎn)染L-選擇蛋白siRNA的P388D1細(xì)胞表面表達(dá)的L-選擇蛋白被阻抑，說明L-選擇蛋白siRNA具有將目的基因沉默的功能。 2.體外黏附實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)L-選擇蛋白siRNA、對照siRNA轉(zhuǎn)染后的P388D1細(xì)胞亦能黏附到淋巴結(jié)上，其黏附位置易為淋巴竇和邊緣竇上。 3.作者等通過歸巢實(shí)驗(yàn)觀察L-選擇蛋白siRNA沉寂L-選擇蛋白的表達(dá)后的P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。 4.作者

5、等采用了整體實(shí)驗(yàn)觀察L-選擇蛋白基因沉默的P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。 三、肝素阻抑小鼠淋巴瘤P388D1細(xì)胞經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的潛能 本文擬進(jìn)一步探討巨噬細(xì)胞樣淋巴瘤細(xì)胞株P(guān)388D1L-選擇蛋白參與淋巴道轉(zhuǎn)移的作用，將肝素與P388D1細(xì)胞共孵育，通過體外淋巴結(jié)黏附實(shí)驗(yàn)、歸巢實(shí)驗(yàn)及整體實(shí)驗(yàn)分析L-選擇蛋白參與淋巴道轉(zhuǎn)移。結(jié)果表明： 1.體外黏附試驗(yàn)結(jié)果表明：P388D1細(xì)胞在淋巴竇和邊緣竇上黏附可以被肝素所抑制。

6、 2.歸巢實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：用CFSE標(biāo)記與肝素共孵育的P388D1細(xì)胞后注射到小鼠足墊，在12小時后轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)的P388D1細(xì)胞數(shù)明顯減少，與對照組相比有顯著差異。 3.整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：肝素能顯著降低P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 上述結(jié)果提示：肝素可能通過抑制了L-選擇蛋白與其天然配體結(jié)合，顯著降低P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。P388D1細(xì)胞向淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移可能與L-選擇蛋白的表達(dá)相關(guān)。 盡管最近有實(shí)

7、驗(yàn)表明L-選擇蛋白參與腫瘤的轉(zhuǎn)移，但L-選擇蛋白在巨噬細(xì)胞樣淋巴瘤淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用未見報(bào)道，且不同的淋巴瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制各不相同。本實(shí)驗(yàn)采用MEL-14阻斷巨噬細(xì)胞樣淋巴瘤P388D1細(xì)胞L-選擇蛋白的表達(dá)；將L-選擇蛋白siRNA轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞樣淋巴瘤P388D1細(xì)胞使L-選擇蛋白的表達(dá)沉默；使肝素抑制巨噬淋巴細(xì)胞瘤P388D1細(xì)胞L-選擇蛋白的天然配體結(jié)合探討L-選擇蛋白在淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用。結(jié)果表明L-選擇蛋白參與巨噬細(xì)胞樣淋