碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌耐藥機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　 研究碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌（CRE）的耐藥機(jī)制，建立獲得性碳青霉烯酶流行監(jiān)測體系。
　　 [方法]
　　 收集同濟(jì)醫(yī)院2007年1月至2010年6月分離的美洛培南抑菌環(huán)直徑≤21mm的腸桿菌科細(xì)菌，測定抗菌藥物敏感性，篩選出碳青霉烯類耐藥菌株，進(jìn)行酶表型和基因型篩查；對(duì)整合子插入序列和碳青霉烯酶基因附屬結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析；采用脈沖場凝膠電泳（PFGE）和Southern印跡雜交方法分析耐藥菌質(zhì)粒；采

2、用多位點(diǎn)序列分型（MLST）方法對(duì)菌株進(jìn)行分型及分析同源性；采用PCR和十二烷基磺酸鈉-聚丙烯凝膠電泳（SDS-PAGE）方法對(duì)菌株的外膜孔道蛋白進(jìn)行分析。
　　 [結(jié)果]
　　 收集并證實(shí)CRE 11株，主要是肺炎克雷伯菌(7/11)?？咕幬锩舾行栽囼?yàn)顯示所有菌株對(duì)大多數(shù)抗菌藥物耐藥，美洛培南8~64μg/ml，亞胺培南4~64μg/ml，厄他培南4~64μg/ml，對(duì)氨基糖苷類和氟喹諾酮類抗菌藥物的敏感性顯著不同。

3、PCR檢測耐藥基因，檢出IMP-4陽性菌株6株，KPC-2陽性菌株3株，其中一株肺炎克雷伯菌（Kpn6617）同時(shí)攜帶blaIMP-4和blaKPC-2。整合子插入序列均不含有碳青霉烯酶編碼基因。對(duì)基因附屬結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示blaKPC-2基因位于由Tn3轉(zhuǎn)座子和Tn4401部分片段構(gòu)成轉(zhuǎn)座子上。PFGE顯示大多數(shù)CRE含有3個(gè)或3個(gè)以上質(zhì)粒。SDS-PAGE檢測外膜孔道蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示僅Kox656存在外膜孔道蛋白（OmpK3

4、5和OmpK36）雙缺失。對(duì)肺炎克雷伯菌進(jìn)行MLST分型，Kpn6617和Kpn6099均屬于ST476型。通過接合試驗(yàn)證明，Kpn6617中攜帶blaIMP-4質(zhì)粒具有轉(zhuǎn)移性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，不同菌株攜帶blaKPC-2的質(zhì)粒具有同源性，而攜帶blaIMP-4的質(zhì)粒不完全同源。
　　 [結(jié)論]
　　 我院CRE主要是肺炎克雷伯菌，產(chǎn)生碳青霉烯酶是細(xì)菌耐藥的主要原因，blaIMP-4是主要的碳青霉烯酶酶型。發(fā)現(xiàn)一株罕見的