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文檔簡介
1、目的:
探討飽和脂肪酸對骨骼肌細胞胰島素作用的影響及收縮促進GLUT4轉(zhuǎn)位的機制。
方法:
第一部分用棕櫚酸孵育L6-GLUT4myc和C2C12-GLUT4myc骨骼肌細胞,酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA)測定棕櫚酸對骨骼肌細胞GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響。應用免疫印跡法(Western blot)檢測棕櫚酸對Akt磷酸化的影響。
2、r> 第二部分在上述工作基礎(chǔ)上,Western blot檢測棕櫚酸對c-Jun N-末端激酶(JNK)、IRS1的磷酸化的影響和BIM(cPKC和nPKC的抑制劑)對棕櫚酸孵育后Akt的磷酸化影響并同時用ELISA法檢測對GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響。
第三部分在上述基礎(chǔ)上電刺激(Electric Pulse Stimulation,EPS)C2C12-GLUT4myc骨骼肌細胞,測定電刺激對GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響
3、、并檢測Compound C(AMPK的抑制劑,CC)、STO-609(CaMKK的抑制劑)、KN93(CaMKⅡ的抑制劑)、CN21(CaMKⅡ的抑制肽)對電刺激調(diào)節(jié)GLUT4myc轉(zhuǎn)位的影響。
結(jié)果:
第一部分結(jié)果顯示:飽和脂肪酸降低了胰島素刺激的L6-GLUT4myc和C2C12-GLUT4myc肌管的GLUT4myc轉(zhuǎn)位和Akt的磷酸化。
第二部分結(jié)果顯示:飽和脂肪酸并不影響JNK、IR
4、S1的磷酸化;PKC抑制劑BIM對飽和脂肪酸孵育后胰島素刺激的GLUT4myc轉(zhuǎn)位的降低沒有影響,即抑制PKC沒有緩解胰島素抵抗作用。
第三部分結(jié)果顯示:電刺激增加了C2C12-GLUT4myc肌管的GLUT4myc轉(zhuǎn)位;Compound C、STO-609、KN93、CN21均抑制了電刺激增加的GLUT4myc轉(zhuǎn)位。
結(jié)論:
1.飽和脂肪酸造成L6-GLUT4myc和C2C12-GLUT4my
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