CD200+大腸癌干細(xì)胞的分離、鑒定及其基因表達(dá)譜特點(diǎn)的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級碩士學(xué)位論文CD200大腸癌干細(xì)胞的分離、鑒定及其基因表達(dá)譜特點(diǎn)的研究IsolationandIdentificationofCD200ColorectalCancerCellsandtheInvestigationofitsGeneExpressionProfile課題來源：廣東省科技計劃項目學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院張珊珊肖冰教授內(nèi)科學(xué)(消化系病學(xué))學(xué)術(shù)型碩士研究生第一臨床醫(yī)學(xué)院答辯委員

2、會主席曾志榮教授答辯委員會委員毛華教授鐘碧慧教授李初俊教授王新穎教授2014年04月30El廣州摘要疾病和抑制排斥反應(yīng)中作為一種免疫耐受信號。腫瘤的發(fā)展和復(fù)發(fā)的特點(diǎn)是發(fā)生免疫逃逸，而產(chǎn)生腫瘤免疫耐受是腫瘤通過逃避免疫系統(tǒng)的識別，使腫瘤能夠繼續(xù)生長，因此大腸癌干細(xì)胞可能通過CD200依賴的免疫機(jī)制逃避免疫監(jiān)視，CD200的表達(dá)很可能是大腸癌腫瘤干細(xì)胞與腫瘤免疫之間的重要橋梁。同時，CD200也被發(fā)現(xiàn)表達(dá)于大腸癌、骨髓瘤、乳腺癌、腦癌、黑色

3、素瘤和正常的間充質(zhì)干細(xì)胞中，并且CD200的表達(dá)與這些腫瘤的發(fā)展進(jìn)程有重要關(guān)聯(lián)。綜上，CD200被認(rèn)為極有可能是一種新型的大腸癌干細(xì)胞標(biāo)志，但這一說法仍缺乏充足的證據(jù)支持。我們前期動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高表達(dá)CD200的大腸癌細(xì)胞致瘤能力明顯較CD200大腸癌細(xì)胞強(qiáng)。同等數(shù)量的兩群細(xì)胞，CD200成瘤速度明顯快于CD200，且最終形成的瘤體更大。因此，根據(jù)本課題組前期科研成果，本研究首先分析CD200在多種大腸癌細(xì)胞系中表達(dá)情況，然后分選出陽性表

4、達(dá)和陰性細(xì)胞進(jìn)行體外成球及侵襲實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證CD200為大腸癌干細(xì)胞表面標(biāo)志。同時分析CD200特異性大腸癌基因表達(dá)譜，探究與大腸癌獨(dú)特生物學(xué)特性相關(guān)的基因表達(dá)及信號通路作用情況，對研究大腸癌干細(xì)胞的作用機(jī)制及尋找根除大腸癌干細(xì)胞的潛在靶點(diǎn)至關(guān)重要。材料與方法：1大腸癌細(xì)胞培養(yǎng)6種大腸癌細(xì)胞株(col0205lovo；sw620；sw480；swlll6；HT29)在含10％胎牛血清的RPMll640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。2流式檢測CD200

5、細(xì)胞所占比例檢測6種大腸癌細(xì)胞株CD200細(xì)胞所占比例，收集約106個細(xì)胞，標(biāo)記APCCD200單克隆抗體，空白對照組標(biāo)記APC一同源IgG單克隆抗體，4“C避光孵育20分鐘，分析緩沖液洗滌2次，3009離心10分鐘，重懸于分析緩沖液中準(zhǔn)備上機(jī)檢測。3無血清培養(yǎng)col0205細(xì)胞將col0205細(xì)胞在含DMEM／F12(I：I)，2％B27，20rig／m1EGF，lOng／mlbFGF和10ng／mlLIF的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周。4