慢病毒介導(dǎo)的cbfα1和satb2對(duì)Wistar大鼠牙周缺損修復(fù)再生作用的研究.pdf

1、目的:
　　 牙周病作為人類(lèi)最普遍的口腔疾病，在全世界范圍均有較高發(fā)病率，是造成成年人牙齒缺失的主要原因之一，嚴(yán)重危害著廣大民眾的口腔和系統(tǒng)健康[1]，其最主要的病理變化就是牙周組織的吸收破壞。如何達(dá)到理想的牙周復(fù)合組織的結(jié)構(gòu)恢復(fù)和功能重建是當(dāng)今牙周組織工程研究的熱點(diǎn)所在[2]。
　　 核心結(jié)合因子α1（corebindingfactorα1，Cbfα1），是骨骼發(fā)育極為重要的轉(zhuǎn)錄因子。它不僅對(duì)成骨細(xì)胞的分化和功能有重要

2、作用[3]，而且在牙胚發(fā)育中也起著重要作用，是牙源性細(xì)胞株所必須的轉(zhuǎn)錄因子[4]。它能夠與順式反應(yīng)元件(Osteoblast-specifics-actingelements，OSEs)特異結(jié)合，啟動(dòng)多個(gè)成骨特異性基因[5]。特殊富含AT序列結(jié)合蛋白(specialAT-richsequencebindingprotein，Satb)-2是一種核基質(zhì)蛋白，它可以與成骨分化相關(guān)的重要調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子Cbfa1、Osterix以及Atf4等協(xié)同

3、作用，在成骨細(xì)胞的分化、牙和顱頜面的發(fā)育中起重要作用[6,7,8]。骨形成是受多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子和骨形成基因調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)同時(shí)研究?jī)蓚€(gè)介由不同途徑對(duì)骨形成和成骨細(xì)胞分化起作用的轉(zhuǎn)錄因子，以期為骨組織工程信號(hào)分子的選擇提供一定的支持。
　　 慢病毒載體能夠高效持久的表達(dá)目的基因，是基因治療領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛的一種基因轉(zhuǎn)移工具。課題組前期成功獲得了高滴度的Cbfα1、Satb2共表達(dá)及分別表達(dá)的慢病毒載體(Lentivirusve

4、ctor，LVs)Plenti6.3-Cbfα1-IRES-Satb2(pL-cs)、Plenti6.3-Cbfα1-IRES-Egfp(pL-c)、Plenti6.3-Satb2-IRES-Egfp(pL-s)、Plenti6.3-IRES-Egfp(pL-e)[9]。本實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)建立起Wistar大鼠牙周缺損模型，探討由慢病毒介導(dǎo)的Cbfα1、Satb2對(duì)大鼠牙周缺損修復(fù)效能的影響。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)納

5、入40只體重160～180g的雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、pL-c組、pL-s組、pL-cs組、和pL-e組五組，每組8只大鼠，各組又分2周和4周兩個(gè)時(shí)間段。實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)下頜骨牙周缺損模型，即在雙側(cè)下頜骨第一磨牙附近建立(一)5mm×4mm×1mm大小直達(dá)根面的缺損。把明膠海綿與25μl生理鹽水、含相同病毒量的pL-c、pL-s、pL-cs、pL-e的終體積為25μl的慢病毒懸液分別復(fù)合，復(fù)合物移植入動(dòng)物下頜骨缺損處。

6、r>　　 術(shù)后2周、4周時(shí)處死大鼠取材，利用脫鈣組織切片Cbfα1、Satb2免疫組化染色及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析檢測(cè)基因的超表達(dá)情況;利用脫鈣組織切片HE染色、Masson染色、骨涎蛋白(bonesialoprotein，BSP)、骨橋蛋白(osteopontin，OPN)免疫組化染色以及組織學(xué)測(cè)量評(píng)價(jià)骨缺損和牙周缺損的修復(fù)情況;同時(shí)取硬組織切片行Masson染色觀察骨缺損和牙周缺損的修復(fù)情況。
　　 結(jié)果:
　　 Cbfα1、

7、Satb2免疫組化及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，第三代慢病毒系統(tǒng)能夠感染缺損區(qū)細(xì)胞，上述基因在Wistar大鼠牙周缺損內(nèi)成功超表達(dá)，pL-c感染組Cbfα1表達(dá)量增加了6.9倍(P＜0.05)，pL-s感染組Satb2表達(dá)量增加了3.8（P＜0.05），pL-cs感染組外源基因Cbfα1、Satb2表達(dá)量分別增加了5.2和2.9倍(P＜0.05)。
　　 HE染色、Masson染色、BSP、OPN免疫組化染色及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示pL-c、p

8、L-s、pL-cs組牙周修復(fù)再生能力均強(qiáng)于空白對(duì)照組及pL-e組(P＜0.05);2周時(shí)pL-c、pL-s組的成骨能力均強(qiáng)于pL-cs組，而pL-c組成骨能力最強(qiáng)(P＜0.05);4周時(shí)pL-c組成骨能力雖仍強(qiáng)于pL-s組，但二者均弱于pL-cs組成骨能力(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 慢病毒介導(dǎo)的Cbfα1、Satb2對(duì)Wistar大鼠牙周缺損均有較強(qiáng)修復(fù)再生作用。2周、4周時(shí)Cbfα1基因的成骨作用強(qiáng)于Sat