阻斷局部RAAS不同位點對大鼠肺纖維化的影響.pdf

1、目的：局部腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）被發(fā)現(xiàn)參與一些組織器官的纖維化過程。本實驗于不同位點阻斷RAAS，觀察阻斷RAAS的不同位點對大鼠肺間質(zhì)纖維化的影響并探討相關(guān)的作用機制，為肺間質(zhì)纖維化的的防治提供有效的治療方法和理論依據(jù)。 方法：將75只SD大鼠隨機分成：正常對照組（N組）、肺纖維化模型組（B組）、卡托普利干預(yù)組（C組）、螺內(nèi)酯干預(yù)組（S組）和氯沙坦干預(yù)組（L組），每組15只大鼠。模型組及各干預(yù)組大鼠氣管內(nèi)注入

2、博萊霉素(BLM，5mg/kg)誘導(dǎo)肺纖維化，對照組氣管內(nèi)注入等量生理鹽水。動物清醒后各組分別每日給予1.5ml等量液體灌胃1次，N組和B組均以生理鹽水灌注，C組予卡托普利60 mg/kg、L組予氯沙坦10 mg/kg、S組予螺內(nèi)酯100mg/kg灌胃。用藥期間觀察大鼠一般情況、體重增長速度及死亡情況；每組于給藥后第7、14、28 天分別隨機麻醉5只，取肺泡灌洗液（BALF）進行細胞計數(shù)和細胞分類；腹腔放血處死后取肺組織行HE染色、Ma

3、sson膠原染色及測定肺組織羥脯氨酸（HYP）含量；免疫組化法檢測單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）蛋白表達；RT-PCR觀察各組大鼠肺組織MCP-1mRNA表達的水平；TUNEL法檢測各組大鼠肺組織細胞凋亡情況。 結(jié)果： 1.一般情況：實驗前各組大鼠一般情況均好，體重無顯

4、著性差異。實驗期間B組大鼠一般情況差，體重增長緩慢，有3只大鼠死亡，C、S、L各干預(yù)組一般情況較B組好，體重增長速度較B組快，實驗期間各有1只大鼠發(fā)生死亡。 2. BALF細胞計數(shù)與分類：B組BALF中細胞總數(shù)明顯增加，各時間點顯著高于N組（P﹤0.01），以后呈逐漸下降趨勢。C、S、L各干預(yù)組細胞總數(shù)高于N組（P﹤0.01），但明顯低于B組（P﹤0.01）。B組巨噬細胞比例相對下降，各時間點均明顯低于N組（P﹤0.01），以后

5、呈逐漸上升趨勢，中性粒細胞比例明顯高于N組（P﹤0.01），以后呈逐漸下降趨勢，淋巴細胞比例顯著低于N組（P﹤0.01），以后呈逐漸下降趨勢。C、S、L各組巨噬細胞比例明顯高于N組（P﹤0.01）和B組（P﹤0.01），以后呈逐漸上升趨勢，中性粒細胞比例明顯低于B組（P﹤0.01），以后呈逐漸下降趨勢，第14、28天恢復(fù)至N組水平（P﹥0.05），淋巴細胞比例低于N組（P﹤0.01），但明顯高于B組（P﹤0.01），以后呈逐漸下降趨勢。

6、C、S、L各組之間比較無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。 3. 肺泡炎及肺纖維化程度：B組肺泡炎和肺纖維化的程度一直高于N組（P﹤0.01）。C、S、L各組和B組病理變化有相似規(guī)律，但各時間點肺泡炎和肺纖維化的程度明顯低于B組（P﹤0.01）。C、S、L各干預(yù)組肺泡炎和肺纖維化程度無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。 4. MCP-1蛋白表達： B組表達水平在各時間點均明顯高于N組（P﹤0.01）。C、S、L各干預(yù)組表達與B組有同

7、一規(guī)律，但表達均較弱，顯著低于B組（P﹤0.01）。C、S、L各組之間比較無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。 5. MCP-1mRNA表達： B組MCP-1mRNA表達量于各時間點均明顯高于N組（P﹤0.01）。C、S、L各干預(yù)組MCP-1mRNA表達量于各時間點均明顯低于B組（P﹤0.01或﹤0.05）。C、S、L各組之間比較無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。 6. TNF-α蛋白表達：B組表達水平在各時間點均明顯高于N組（P

8、﹤0.01）。C、S、L各干預(yù)組表達與B組有同一規(guī)律，但表達均較弱，顯著低于B組（P﹤0.01）。C、S、L各組之間比較無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。 7.凋亡指數(shù)： B組細胞凋亡指數(shù)各時間點均明顯高于N組(P﹤0.01), C、S、L各干預(yù)組凋亡指數(shù)明顯低B組(P﹤0.01)，干預(yù)組之間差異無顯著性（P﹥0.05）。 8. HYP測定：B組HYP含量一直顯著高于N組（P﹤0.01），呈逐漸上升趨勢。C、S、L各干預(yù)組成

9、低水平增高趨勢，各時間點比B組明顯降低（P﹤0.01）。C、S、L各組之間比較無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。 結(jié)論： 1.通過氣管內(nèi)注入博萊霉素的方法成功地復(fù)制了大鼠肺纖維化動物模型，結(jié)果顯示本實驗動物模型與臨床肺纖維化表現(xiàn)相似。 2.局部RAAS均參與了肺纖維化的形成，阻斷RAAS可減輕肺纖維化。 3. RAAS不同環(huán)節(jié)阻斷劑可能通過抑制炎性反應(yīng)，下調(diào)MCP-1和TNF-α表達，減輕HYP的合成，抑制肺