利用玉米轉(zhuǎn)座子Ac-Ds構(gòu)建水稻插入群體.pdf

1、將轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法應(yīng)用于水稻，構(gòu)建水稻插入群體，是進(jìn)行水稻功能基因組學(xué)研究的重要手段。本論文研究在玉米轉(zhuǎn)座子Ds的基礎(chǔ)上，利用雙元表達(dá)載體構(gòu)建了一個(gè)帶有質(zhì)粒拯救系統(tǒng)的Activator/Dissociation(簡(jiǎn)稱Ac/Ds)激活轉(zhuǎn)座子作為插入標(biāo)簽，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入水稻，經(jīng)分子生物學(xué)方法檢測(cè)，獲得了分別含Ac和Ds的單拷貝株系，進(jìn)行了Ac和Ds的去雄雜交以擴(kuò)大突變?nèi)后w，為克隆基因研究水稻基因組打下了很好的基礎(chǔ)。獲得主要結(jié)果如下： 構(gòu)

2、建了基于Ac和Ds結(jié)構(gòu)的載體，用于水稻插入群體的建立。其中Ds是含有激活標(biāo)簽、基因捕獲器結(jié)構(gòu)和質(zhì)粒拯救系統(tǒng)的載體，利用根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)介導(dǎo)的方法將載體轉(zhuǎn)化粳稻品種中花17的胚性愈傷組織，獲得了35個(gè)轉(zhuǎn)Ac載體的獨(dú)立株系，獲得了8個(gè)轉(zhuǎn)Ds的獨(dú)立株系。PCR檢測(cè)結(jié)果表明，含Ac和Ds的轉(zhuǎn)基因株系全部呈陽性。Southern雜交獲得了15個(gè)Ac單拷貝獨(dú)立株系，4個(gè)Ds單拷貝獨(dú)立株系。表明轉(zhuǎn)座子Ac