水稻Ac-Ds組織培養(yǎng)再生植株的獲得及Ds的插入分析.pdf

1、用含Ac/Ds轉(zhuǎn)座元件的水稻種子為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)低溫處理和誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選，誘導(dǎo)出高質(zhì)量的胚性愈傷組織，研究植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比、繼代方式、干燥處理和添加物、不同再分化方法處理等對(duì)愈傷組織再分化的影響，篩選出最適的分化培養(yǎng)基配方，經(jīng)分化培養(yǎng)獲得一定量的再生植株(Ro)，并經(jīng)田間栽培收獲再生植株的成熟種子(R1)。從再生植株(Ro)對(duì)葉片取樣，提取基因組DNA，采用PCR方法檢測(cè)Ro植株的Ac/Ds插入，并嘗試采用TAIL-PCR技術(shù)擴(kuò)增

2、側(cè)翼于Ds插入的DNA序列。以Ds側(cè)翼序列為待查詢序列，進(jìn)行Ds插入位點(diǎn)的模擬分析. 主要結(jié)果如下： 1.培養(yǎng)基中添加1％甘露醇后愈傷組織的質(zhì)地得到改善且增殖率明顯提高；通過(guò)干燥處理、不同瓊脂濃度等不同分化培養(yǎng)條件處理，水稻愈傷組織成苗率都有所提高。分化培養(yǎng)基中分別添加適量iP和Na2SiO3，也可以提高成苗率；采用三步分化法成苗率達(dá)到53％，明顯優(yōu)于兩步分化法和直接分化法。 2.在5種基因組DNA的提取方法中，

3、SDS法提取的基因組DNA純度及濃度較高，較之CTAB法、簡(jiǎn)易法及脲法效果更好。 3.對(duì)獲得的111株再生植株(Ro)進(jìn)行了Ac/Ds檢測(cè)。結(jié)果顯示，有94％(105/111)的再生植株含有Ac/Ds，6％(6/111)的再生植株僅含Ac.只帶有Ac而無(wú)Ds的再生植株是由于Ds切離而丟失，其具體機(jī)制目前還不清楚，有待進(jìn)一步研究。因此，利用組織培養(yǎng)的方法獲得更多的突變體來(lái)構(gòu)建突變體庫(kù)是可行的。 4.在實(shí)驗(yàn)操作的基礎(chǔ)上，分析