苜蓿內生菌的分離及生防菌株的篩選與鑒定.pdf

1、苜蓿（alfalfa）是奶牛等草食動物的重要優(yōu)質飼草之一，被譽為“牧草之王”。內生菌是在植物組織中定植的微生物（通常是細菌、真菌和放線菌）。它們能夠產生許多生物活性次生代謝產物，如生物堿、酚酸、醌、類固醇、皂苷、單寧和萜類化合物，作為抗微生物、抗昆蟲和抗癌等性能的潛在候選者，也是微生物農藥的重要資源。本文分離篩選苜蓿內生菌并評價其生防潛力，結果如下:
　　1、苜蓿內生菌的分離
　　2015-2016年從河北、內蒙古、寧夏共采

2、集符合采集條件的苜蓿樣品108株，采用組織研磨法分離獲得409株內生菌。其中，細菌306株，真菌101株，放線菌2株。內生菌有125株菌株從苜蓿葉中獲得，101株菌株從苜蓿莖中獲得，183株菌株從苜蓿根中獲得。
　　2、苜蓿內生菌離體平板拮抗評價
　　通過平板拮抗試驗，從2015年分離的362株內生菌中篩選出35株對立枯絲核菌、苜蓿鐮刀菌、黃瓜枯萎病菌和疫霉菌中至少一種病原茵有抑菌作用菌株。其中，12株內生茵對4種病原菌有拮

3、抗效果，為細菌3株，真菌8株，放線菌1株。內生細菌NANX36L-1對4種病原菌的抑菌效果最好，均達到了抑茵活性極強，鑒定為枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)。內生真菌PDANM2S-4對4種病原菌的平均抑制率最高，為81.2％，鑒定為哈茨木霉（Trichoderma harzianum）。
　　3、苜蓿內生菌活體防病評價
　　通過試管苗檢測2015年分離的362株內生菌對黃瓜枯萎病的生防效果，結果有37株葉

4、部相對防效≥60％，其中NA NX51R-5、NA HB1S-3和NA NM1S-1防效最好，達到了84％以上。有21株根部防效達到60％以上，其中NANX90R-8防效最好，達到了84％。對篩選獲得37株優(yōu)異菌株，再次進行黃瓜枯萎病活體評價試驗，最終篩選出3株高效的生防潛力細菌菌株NANX51R-5、NANX90R-8和NANM1S-1。
　　4、高效生防潛力菌株對苜蓿根腐病的防治作用
　　對篩選獲得的上述3株具有優(yōu)異生防

5、活性的內生細菌進行了苜蓿苗培養(yǎng)皿試驗、苜蓿試管苗試驗和盆栽試驗，結果表明3種內生菌對苜蓿不致病，且NA NM51R-5和NANM1S-1在適當濃度時對苜蓿有促生作用，對尖孢鐮刀菌造成的苜蓿根腐病具有明顯的防治作用。其中NANM1S-1盆栽相對防效為57.1％。
　　5、內生菌分子鑒定
　　使用現(xiàn)代分子生物學手段，對離體平板拮抗試驗中有抑菌效果菌株進行了分子鑒定。結果表明26株內生細菌分屬于6個屬，其中芽胞桿菌屬(Bacill