章魚(Octopus)多糖的提取分離及結構研究.pdf

1、章魚(Octopus)是一種海洋軟體動物,廣泛分布于渤海、黃海、東海和南海等海域,章魚多糖和糖蛋白能夠促進小鼠脾細胞增殖,增強免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能,具有免疫調(diào)節(jié)的作用。本文以短蛸的胴體和腕部鮮肉為原料,通過多種提取和分離技術,分別獲得了短蛸胴體冷水提組分(WBP-1a、WBP-1b、WBP-2a、WBP-2b)、短蛸胴體酶提組分(EBP-1a、EBP-1b、EBP-2a、EBP-2b)、短蛸腕部冷水提組分(WFP-1a、WFP

2、-1b、WFP-2a、WFP-2b)、短蛸腕部酶提組分(EFP-1a、EFP-1b、EFP-1c、EFP-2a、EFP-2b)共17種多糖組分,并采用多種化學分析及現(xiàn)代儀器分析技術,初步確定了EFP-1a和WFP-2b降解三糖的化學結構,另外對EFP-2a和WFP-2b兩個組分進行了化學修飾。
　　 采用冷水提取、聯(lián)合酶解的方法依次對短蛸胴體和腕部進行提取,對提取得到的多糖組分WBP、WFP、EBP、EFP分別進行了初步的理化性

3、質(zhì)研究。其重均分子量分別為162.6 kD、266.4 kD、139.1 kD和127.9 kD。PMP衍生高效液相色譜法測得EFP分離純化得到的組分EFP-1a的單糖組成只含有葡萄糖(Glc),WFP分離得到的組分WFP-2b和EFP分離得到的組分EFP-2a的單糖組成比較復雜,含有葡萄糖胺(GlcN)、氮乙酰氨基半乳糖(GalNAc)、甘露糖(Man)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖(Gal)和鹽藻糖(Fuc)。
　　 對

4、EFP和WFP分別采用Q Sepharose 4 Fast Flow離子交換層析柱和Sepharcryl S300凝膠排阻層析柱進一步純化,得到了EFP-1a、EFP-2a和WFP-2b具有較高純度的多糖組分。經(jīng)測定,其重均分子量為101.8 kD、6.7 kD和28.2 kD,糖含量為92.3％、17.0％和17.0％,蛋白含量為1.9％、22.7％和15.7％,糖醛酸含量為19.9％、8.8％和14.1％,硫酸根含量為3.3％,4.

5、9％和8.0％,在對三者基本理化性質(zhì)進行研究的基礎上,對EFP-1a采用全水解、PMP衍生高效液相色譜法、甲基化反應等多種化學分析方法和HPLC、IR、UV、NMR和GC-MS等現(xiàn)代儀器分析技術對其結構進行深入研究,證實EFP-1a為α-葡聚糖,主鏈為-1,4-鍵型,分子中含有少量的-1,2-鍵型。采用部分酸水解法將WFP-2b降解成寡糖片段、輔以TLC薄層色譜層析檢測確定降解條件,采用Bio-Gel P6凝膠柱進行分離,對得到的三糖片

6、段(WFP-2b3)的結構采用HPLC、MS和NMR儀器分析技術進行研究,結果表明WFP-2b3由GlcUA、Fuc和GalNAc組成,連接方式為:GlcUAβ1→4(GalNAcα1→03)Fuc,其中Fuc處于還原端,α和β構型相互轉換。
　　 為提高EFP-1a和WFP-2b的藥用價值,本文采用三氧化硫-吡啶法對其進行硫酸酯化修飾,產(chǎn)物經(jīng)純化后得到了硫酸酯化衍生物(EFP-1aS和WFP-2bS)。經(jīng)測定,WFP-2bS的