microRNA-126在子癇前期患者臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　通過研究miR-126在子癇前期和正常妊娠患者臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá)差異,及miR-126表達(dá)變化對內(nèi)皮祖細(xì)胞血管形成相關(guān)功能的影響,探討miR-126在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　1.選擇子癇前期和正常妊娠患者各12例,收集臨床基本資料;
　　2.分離、培養(yǎng)正常妊娠患者和子癇前期患者的臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞,通過內(nèi)皮祖細(xì)胞特有的形態(tài)和其吞噬DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I的功能進(jìn)行

2、鑒定;
　　3.實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測兩組細(xì)胞中miR-126的表達(dá);
　　4.分離培養(yǎng)正常妊娠患者臍血EPCs,將細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組和空白對照組,分別轉(zhuǎn)染miR-126mimics、mimics對照和不進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染;熒光顯微鏡觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EPCs的效率;
　　5.實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后三組細(xì)胞miR-126的表達(dá);
　　6.通過觀察梭形細(xì)胞的數(shù)量檢測miR-126表達(dá)升高對EPCs分化能力

3、的影響;
　　7.Transwell小室模型檢測miR-126表達(dá)升高對EPCs遷移能力的影響;
　　8.小管形成實(shí)驗(yàn)檢測miR-126表達(dá)升高對EPCs管腔形成能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1.分離培養(yǎng)單個核細(xì)胞,DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I雙染色陽性細(xì)胞為正在分化的EPCs;
　　2.子癇前期組miR-126的相對表達(dá)水平較正常妊娠組降低(64.3±9.5)％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

4、5);
　　3.轉(zhuǎn)染后EPCs中miR-126的相對表達(dá)水平:實(shí)驗(yàn)組較陰性對照組升高(735.50±40.35)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);陰性對照組較空白對照組降低(10.37±5.32)%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);
　　4.EPCs接種24h后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分化能力增強(qiáng),其梭形細(xì)胞數(shù)目為(130±3.5)個,高于陰性對照組(59±2.6)個,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);空白對照組為(53±3.0)

5、個,與陰性對照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);
　　5.EPCs接種24h后,實(shí)驗(yàn)組遷移能力增強(qiáng),遷入小室下室的細(xì)胞數(shù)目,實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組和空白對照組分別為(128.4±7.5)、(70.6±4.7)、(83.3±4.2)個,實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);空白對照組與陰性對照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);
　　6.EPCs接種24小時后,各組EPCs均未在Matrigel上形成明顯

6、的管腔網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),但實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組及空白對照組EPCs形成的分支點(diǎn)數(shù)分別為(59±6.7)、(26±3.5)和(29±4.3)個,實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),空白對照組與陰性對照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　子癇前期患者臍血EPCs中miR-126的表達(dá)較正常妊娠患者明顯下降,且miR-126表達(dá)升高能促進(jìn)EPCs分化、遷移及管腔形成能力。miR-126可能與子癇前期的