α-Synuclein的自噬性降解途徑及可能機(jī)制.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文αSynuclein的自噬性降解途徑及可能機(jī)制姓名：劉康永申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：劉春風(fēng)20080401a—Synuclein的自噬性降解途徑及可能機(jī)制中文摘要在氧化應(yīng)激狀態(tài)下的PD細(xì)胞模型，在此基礎(chǔ)上，分別給予自噬誘導(dǎo)劑_Rapamycin和抑制劑Wortmannin，檢測細(xì)胞的增殖活性，還采用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變以及自噬的特征行改變，同時(shí)檢測a—synuclein、LC3蛋白的表達(dá)和細(xì)胞

2、培養(yǎng)基中CAT、SOD的水平。結(jié)果在氧化應(yīng)急狀態(tài)下(MPP)，突變型a—synuclein的表達(dá)明顯增加，自噬水平顯著減低；細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示：線粒體腫脹、空泡化，嵴少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，細(xì)胞核皺縮，染色質(zhì)有邊集，細(xì)胞有凋亡的傾向。而聯(lián)合使用自噬抑制劑一Wortmannin處理過細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)液中CAT和SOD的水平較單獨(dú)應(yīng)用MPP的細(xì)胞有顯著降低，細(xì)胞增殖活性明顯降低，細(xì)胞死亡明顯增加；asynuclein的表達(dá)明顯增加，自噬水平顯著減低；細(xì)

3、胞超微結(jié)構(gòu)顯示：線粒體腫脹，嵴少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，細(xì)胞核皺縮，染色質(zhì)有邊集，并可見凋亡小體。相反，聯(lián)合使用自噬誘導(dǎo)劑Rapamycin提高了細(xì)胞培養(yǎng)液中CAT和SOD水平，促進(jìn)了細(xì)胞的增殖和分化；a—synuclein的表達(dá)明顯減低，自噬水平顯著增高；細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示：胞質(zhì)中可見多個(gè)具有特征性雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體，胞核、線粒體正常。結(jié)論在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，突變型a—synuclein(A30P)對外源性毒素的敏感性明顯增高，a—synucle

4、in聚集更為顯著，自噬水平明顯減低，從而導(dǎo)致自噬應(yīng)激；提高自噬水平有助于突變型asynuclein的降解，對細(xì)胞具有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】帕金森病；自噬；PCI2細(xì)胞；a—synuclein第三部分Rapamycin治療帕金森病小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究及可能機(jī)制目的探討自噬誘導(dǎo)劑Rapamycin對1一甲基4一苯基一1，2，3，6一四氫吡啶(MPl限)誘導(dǎo)的帕金森病(PD)小鼠模型是否具有治療作用及可能機(jī)制。方法Rapamycin采用靜脈直接給

5、藥對MPTP誘導(dǎo)的PD／J鼠模型進(jìn)行治療，而后采用免疫組織化學(xué)及蛋白印跡分析(Westernblot)的方法對PD相關(guān)標(biāo)志物酪氨酸羥化酶㈣以及asynuclein的可能改變進(jìn)行檢測，并采用高效液相色譜電化學(xué)檢測儀(HPLCECD)檢測紋狀體單胺類遞質(zhì)的可能變化；還采用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變以及自噬的特征行改變。為進(jìn)一步研究自噬在異常積聚的asynuclein降解過程中的作用，我們對其中一個(gè)關(guān)鍵的自噬基因一微管相關(guān)蛋白輕鏈3(mic