蜈蚣酸性蛋白抗動脈粥樣硬化作用及對離體心房、血管的影響.pdf

1、目的：探討蜈蚣酸性蛋白(Centipede Acidic Protein，CAP)對大鼠動脈粥樣硬化及豚鼠離體竇房結(jié)頻率、心房肌收縮力、胸主動脈血管環(huán)的作用及機制。 方法： 第一部分CAP抗動脈粥樣硬化實驗研究 1 CAP的提取蜈蚣研成粗粉，加95％乙醇，低溫超聲、離心、過濾，棄去濾液；殘渣加入磷酸鹽緩沖液低溫超聲、冷滲，放置后離心、過濾；濾液裝半透膜，透析后得透析液；用1mol/LH3P04調(diào)透析液pH值至4

2、.4，再緩慢滴加95％乙醇達40％，冷析后取樣離心；沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解，取1ml在560姍波長下測吸收度，冷藏放置備用。提取后生藥濃度為O.484g/ml，酸性蛋白含量為15.8mg/mla2 CAP干預(yù)動脈粥樣硬化實驗SD大鼠60只，隨機分為五組：正常組、模型組、陽性藥物組、CAP低劑量及高劑量組，每組12只。高脂飼料加維生素D3復(fù)制大鼠動脈粥樣硬化模型。實驗開始的第4天，CAP高、低劑量組分別腹腔注射CAP 2.0g/kg/d、

3、1.0g/kg/d，陽性藥物組每日以辛伐他汀lOmg/kg/d灌胃；正常對照及模型組等量生理鹽水腹腔注射。5周后，頸總動脈插管測血流動力學變化；股動脈取血，檢測血脂、血液流變學、血清NO、SOD、MDA含量及血漿ET水平：病理觀察主動脈、肝臟形態(tài)改變。 第二部分CAP對豚鼠竇房結(jié)頻率及心房肌收縮力的影響 豚鼠30只，雌雄不拘，制備離體心房(左右心房相連)標本，連接MS4000U-1C生物信號記錄分析系統(tǒng)，觀察不同濃度的

4、CAP對豚鼠離體竇房結(jié)頻率及心房肌收縮力的影響。 第三部分CAP對豚鼠胸主動脈血管環(huán)的影響健康成年豚鼠30只，制備胸主動脈血管環(huán)標本，連接MS4000U-1C生物信號記錄儀，觀察不同濃度CAP對胸主動脈血管環(huán)張力影響及不同阻斷劑對其作用。 結(jié)果： 第一部分CAP抗動脈粥樣硬化實驗研究 1 大鼠一般狀況正常組大鼠活動自如、正常飲食。模型組大鼠高脂飲食后體重增長明顯，但隨實驗進程，活動減少、精神狀態(tài)差、后期飲

5、食明顯減少。陽性藥物組、CAP高、低劑量組較正常組精神狀態(tài)差但優(yōu)于模型組。 2 血流動力學變化模型組大鼠心室內(nèi)壓最大上升速率(1v+dp/dt<,max>)明顯低于正常對照組，室內(nèi)壓達峰時間(t-dp/dt<,max>)明顯長于正常對照組。陽性藥物組、CAP高劑量組較模型組lv+dp/dt<,max>明顯升高，有顯著性差異；t-dp/dt<,max>較模型組縮短，但差異無顯著性。 3 血脂變化 模型組大鼠T

6、G、TC、LDL水平較正常對照組明顯升高，HDL明顯降低；陽性藥物組、CAP高劑量組較模型組TG、LDL水平明顯降低，HDL明顯升高；CAP低劑量組較模型組TG降低明顯。 4 血液流變學改變模型組較正常組血液黏稠度、紅細胞比容明顯升高，血沉加快；陽性藥物組、CAP高、低劑量組血液黏稠度、紅細胞比容較模型組明顯降低。 5 血清NO、SOD、MDA及血漿ET變化模型組較正常組ET、MDA明顯增高，N0、SOD明顯降低。陽

7、性藥物組、CAP高、低劑量組較模型組ET、MDA水平明顯降低，NO、SOD明顯升高。 6 形態(tài)學改變 6．1主動脈形態(tài) 6．1．1大體觀察正常組大鼠胸主動脈血管彈性良好、內(nèi)膜表面光滑、富有光澤；模型組血管彈性下降，內(nèi)膜粗糙不平整；陽性藥物組與正常組相比變化不明顯，CAP高、低劑量組病變明顯輕于模型組。 6．1．2光鏡觀察正常組大鼠胸主動脈壁層次結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)未見異常。模型組可見內(nèi)皮細胞脫落，內(nèi)膜增厚、

8、纖維化等明顯粥樣硬化病變。陽性藥物與正常組相比無明顯差異。CAP高、低劑量組有粥樣硬化病變，但程度明顯輕于模型組。 6．2肝臟形態(tài) 6．2．1大體觀察正常組大鼠肝臟紅潤，有彈性。模型組大鼠肝臟體積明顯增大、外形飽滿，呈黃褐色，觸之有油膩感，質(zhì)地較脆。 陽性藥物與正常組比較沒有明顯差別；CAP高、低劑量組亦呈黃褐色，但病變輕于模型組。 6．2．2光鏡觀察正常組大鼠肝細胞、肝小葉形態(tài)正常；模型組大鼠鏡下可見

9、明顯的脂肪變性。陽性藥物組，CAP高、低劑量組肝細胞脂肪變及及空泡樣變程度明顯輕于模型組。 第二部分CAP對豚鼠竇房結(jié)頻率及心房肌收縮力的影響 1 給予CAP后竇房結(jié)頻率明顯加快，且呈濃度依賴性； 2 給予CAP后心房肌收縮明顯增強，且呈濃度依賴性； 3 α受體阻斷劑酚妥拉明預(yù)孵育后CAP的正性肌力作用明顯減弱；β受體阻斷劑普萘洛爾預(yù)孵育后CAP的正性頻率及正性肌力作用均明顯減弱。 第三部

10、分CAP對豚鼠胸主動脈血管環(huán)的影響 1 給予CAP后，胸主動脈血管環(huán)收縮作用明顯增強，且高濃度收縮增加幅度明顯； 2 α受體阻斷劑酚妥拉明及鈣通道受體阻斷劑硝苯地平預(yù)孵育后，CAP對胸主動脈血管環(huán)的收縮作用均明顯減弱。 結(jié)論： 1．CAP通過降低動脈粥樣硬化大鼠血脂水平，改善血液粘稠度，保護內(nèi)皮細胞，增強抗氧化損傷，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化作用。 2．CAP濃度依賴性的提高竇房結(jié)頻率，增強心房肌收縮