NRK-52E缺血再灌注損傷時(shí)KIM-1、NO變化及蟲草對(duì)其干預(yù)作用.pdf

1、目的: 通過抗霉素刺激大鼠腎小管上皮細(xì)胞（NRK-52E）模擬體外缺血再灌注損傷（ischemia/reperfusion injury，I/R injury）過程，觀察I/R損傷時(shí)NRK-52E中NO及腎損傷分子-1（kidney injury molecule-1，KIM-1）的變化及冬蟲夏草對(duì)其干預(yù)作用。 方法: 將體外培養(yǎng)的NRK-52E分為對(duì)照組、模型組、蟲草干預(yù)組。蟲草組予含40mg/L蟲草原液的培基

2、預(yù)處理72h，另兩組予空白培基平行培養(yǎng)。72h后參考文獻(xiàn)所載的方法，NRK-52E予去除培養(yǎng)基后，經(jīng)10-10mol/L抗霉素（Antimycin A，AA）刺激一小時(shí)后再加入培基，模擬體外缺血再灌注損傷過程。在刺激前，刺激后1h，加入培基再灌注10min，30min，60min，120min共六個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別在不同的時(shí)間點(diǎn)終止實(shí)驗(yàn)。用流式細(xì)胞儀以Annexin V，PI染色檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況；分別用硝酸還原酶法和ELISA檢測(cè)各組細(xì)

3、胞上清液NO與Kim-1蛋白的濃度；用逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）觀察各組細(xì)胞Kim-1mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.NRK細(xì)胞經(jīng)抗霉素A刺激一小時(shí)模擬I/R損傷后，與刺激前NRK細(xì)胞相比較，細(xì)胞凋亡率顯著增高（P<0.05），Kim-1表達(dá)上調(diào)（P<0.05）；并且隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡率逐漸增高，Kim-1表達(dá)逐漸增強(qiáng)。NO濃度隨灌注時(shí)間延長(zhǎng)發(fā)生類似變化。 2.與模型組比較，蟲草組NRK-5