血管內(nèi)皮生長因子反義寡核苷酸對白血病細(xì)胞系HL60細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：本試驗(yàn)研究旨在探討VEGFASODN抑制內(nèi)源性VEGFmRNA的表達(dá)效果；VEGFASODN與白血病細(xì)胞凋亡的關(guān)系；VEGFASODN與VP16聯(lián)合作用白血病細(xì)胞的效應(yīng)是否有相加作用?！　〔牧吓c方法：1.白血病細(xì)胞系HL60由鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院組胚教研室提供。2.試驗(yàn)分為VEGFASODN組、VEGF錯義寡核苷酸序列(VEGFMSODN)和空白對照組(前兩組又各含5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L三組濃度)，用陽離子

2、脂質(zhì)體介導(dǎo)硫代修飾VEGF寡核苷酸(VEGFODN)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)白血病細(xì)胞系HL60細(xì)胞后，采用MTT法分別在24h、48h檢測各組細(xì)胞的增殖抑制率，并找出VEGFASODN轉(zhuǎn)染最適作用時間和最適作用濃度。3.應(yīng)用20μmol/L的VEGFODN轉(zhuǎn)染HL60細(xì)胞，在孵育48h后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分別檢測VEGFASODN組、VEGFMSODN組及空白對照組的VEGFmRNA表達(dá)水平；4.細(xì)胞凋亡檢測：細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

3、凋亡小體；凋亡細(xì)胞DNA梯形帶；流式細(xì)胞儀(FCM)AnnexinV-FITC/PI檢測細(xì)胞凋亡。5.聯(lián)合應(yīng)用VEGFASODN和5μg/L、10μg/L、20μg/L三種濃度的VP16作用于HL-60細(xì)胞，采用FCMAnnexinV-FITC/PI檢測細(xì)胞凋亡率。6.所得結(jié)果運(yùn)用SPSS10.0統(tǒng)計學(xué)軟件包處理，統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。方差不齊時進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換?！　〗Y(jié)論：　　1.V