高效液相色譜在白血病研究中的應(yīng)用.pdf

1、高效液相色譜(HPLC)作為一種高效、快速的分離分析技術(shù)，已廣泛的應(yīng)用于眾多的研究領(lǐng)域中，特別是多維色譜以及聯(lián)用技術(shù)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用，也為進(jìn)一步進(jìn)行一些臨床監(jiān)測(cè)和疾病的早期診斷提供了研究的新技術(shù)和新思路，越來(lái)越使HPLC受到了關(guān)注。對(duì)臨床復(fù)雜的樣本，如何選擇合適的HPLC分析手段來(lái)是實(shí)現(xiàn)臨床的監(jiān)測(cè)和早期診斷面臨的一大課題。針對(duì)于此，本文將從白血病患者血清、白血病細(xì)胞以及慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562中入手，采集正常人血清、血漿和

2、相關(guān)細(xì)胞株并用色譜分離，通過(guò)樣本中差異蛋白的分析，建立了白血病蛋白質(zhì)組學(xué)體系研究中HPLC方法。 論文包括四部分：1.文獻(xiàn)綜述：概括的介紹了HPLC法在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域、蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用，以及目前蛋白質(zhì)組學(xué)在白血病研究中的重要意義。 2.二維液相色譜-質(zhì)譜分離鑒定白血病患者血清中的蛋白質(zhì)：對(duì)三種不同的二維色譜分離模式進(jìn)行了條件優(yōu)化，選用弱陰離子交換色譜-反相高效液相色譜作為血清蛋白質(zhì)組研究中的分離方法，對(duì)白血病患者及健

3、康人的血清蛋白進(jìn)行了分離；采用基質(zhì)輔助電離解析時(shí)間飛行質(zhì)譜對(duì)分離組分進(jìn)行了檢測(cè)，通過(guò)分析質(zhì)譜結(jié)果，找出了白血病患者與健康人血清中的差異蛋白。 3.HPLC分離-質(zhì)譜鑒定K562細(xì)胞株蛋白：建立了二維色譜分離-基質(zhì)輔助電離解析時(shí)間飛行質(zhì)譜檢測(cè)細(xì)胞蛋白的研究方法。通過(guò)反相高效液相色譜、弱陰離子交換色譜-反相色譜、排阻色譜-反相色譜這三種色譜模式對(duì)K562細(xì)胞蛋白進(jìn)行分離，收集的色譜餾分采用基質(zhì)輔助電離解析時(shí)間飛行質(zhì)譜檢測(cè)，將這三種分

4、離模式所獲得的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較后得出結(jié)論：當(dāng)選擇排阻色譜-反相色譜構(gòu)建K562細(xì)胞蛋白質(zhì)圖譜時(shí)，可以檢測(cè)到分子量從2KD到130KD左右的120多種蛋白，所獲得的蛋白質(zhì)數(shù)目最多，信息最為全面。此法的建立為白血病的臨床研究提供了一種有效的手段。 4.RP-HPLC/MS測(cè)定白血病細(xì)胞中的蛋白質(zhì)：采用反相高效液相色譜法對(duì)由健康人和白血病患者外周血分離出的單個(gè)核細(xì)胞蛋白進(jìn)行分離，并用基質(zhì)輔助電離解析時(shí)間飛行質(zhì)譜檢測(cè)，比較所獲得的質(zhì)譜