rhG-CSF調(diào)控分子伴侶介導(dǎo)自噬抑制缺血缺氧誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷的機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　我國(guó)逐漸步入老齡化社會(huì)，腦血管疾病的發(fā)病率日益增加，已成為危害中老年人身體健康的主要疾病之一。腦血管病以高致殘率、高死亡率、高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)，給家庭及社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，同時(shí)給患者的身心健康帶來了嚴(yán)重的影響。腦卒中分為缺血性卒中和出血性卒中，其中缺血性卒中(cerebral inschemic stroke，CIS)稱為腦梗塞(cerebral infarction，CI)，占到了腦卒中總量的60％-80％。對(duì)于腦缺血

2、損傷機(jī)制、有效預(yù)防措施和治療藥物的研究，一直是廣大臨床及科研人員的研究重點(diǎn)。目前大量實(shí)驗(yàn)表明重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,，rhG-CSF)，具有腦保護(hù)作用。但其機(jī)制尚未完全明確，可能與其抗凋亡、動(dòng)員骨髓干細(xì)胞進(jìn)入腦缺血受損區(qū)域分化為神經(jīng)細(xì)胞，促進(jìn)血管生成，抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子釋放等作用有關(guān)。自噬(Autophagy)即

3、自我吞噬(self-eating)，此過程可將細(xì)胞內(nèi)某些病毒、病原體及錯(cuò)誤折疊而形成的凝聚蛋白或受損的細(xì)胞器降解清除。這對(duì)于維持機(jī)體正常功能具有重要意義。血液系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)的研究已證實(shí)，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,，rhG-CSF）可參與調(diào)節(jié)自噬，從而在血液細(xì)胞分化及減輕心肌缺血損傷中發(fā)揮作用。那么分子伴侶介導(dǎo)自噬是否在腦缺血

4、損傷中發(fā)揮作用，這是本實(shí)驗(yàn)的研究重點(diǎn)。
　　目的：
　　已有文獻(xiàn)報(bào)道rhG-CSF對(duì)腦缺血有保護(hù)作用，但其作用機(jī)制尚未完全明確。本研究將從細(xì)胞實(shí)驗(yàn)水平及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平兩方面來初步探討rhG-CSF與分子伴侶介導(dǎo)自噬(chaperone-mediatedautophagy，CMA)的關(guān)系，從而進(jìn)一步明確rhG-CSF的腦缺血保護(hù)作用機(jī)制，為rhG-CSF的臨床應(yīng)用提供更多的理論依據(jù)。
　　方法：
　　制備SH-SY5

5、Y細(xì)胞缺氧模型，給予不同劑量rhG-CSF孵育。Westernblot檢測(cè)各組LAMP-2a及HSC-70的表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)各組HSC-70表達(dá)。將54只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，每組18只。采用線栓法制備大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebr alartery occlusion，MCAO)模型。實(shí)驗(yàn)組給予rhG-CSF注射5天(50ug/kg·d)，對(duì)照組給予等量生理鹽水注射5天。使用改良神經(jīng)功能缺

6、損評(píng)分表(modified neurological severity score，mNSS)對(duì)三組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。Westernblot及免疫組化法分別檢測(cè)各組LAMP-2a、HSC-70及MAP-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，rhG-CSF可上調(diào)細(xì)胞缺氧模型中HSC-70及LAMP-2a的表達(dá)且呈劑量依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組LAMP-

7、2a、HSC-70表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組LAMP-2a、HSC-70表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。與假手術(shù)組相比，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組腦缺血灶周邊區(qū)腦組織MAP-2表達(dá)增加;與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組腦缺血灶周邊區(qū)腦組織MAP-2表達(dá)增加。使用mNSS評(píng)分表進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。與假手術(shù)組相比，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于假手術(shù)組(p＜0.05);與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯