B7-H1作為受體對胃癌干細(xì)胞增殖能力的影響.pdf

1、目的：
　　探討B(tài)7-H1作為受體對胃癌干細(xì)胞增殖能力的影響。
　　方法：
　　通過收集胃癌臨床標(biāo)本，以Lgr5為干細(xì)胞標(biāo)記物篩選胃癌干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測 B7-H1+和 B7-H1-胃癌干細(xì)胞中 Ki67+細(xì)胞比例,比較增殖能力差異。選用 SGC-7901細(xì)胞系，在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成細(xì)胞球，通過RT-qPCR檢測球細(xì)胞和貼壁細(xì)胞中干細(xì)胞標(biāo)志物：CD133、CD-166、Lgr5、Sox2、Oct4、Nanog、

2、ALDH、CD44和 GAPDH的表達(dá)情況；CCK8、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠移植成瘤實(shí)驗(yàn)分別檢測球細(xì)胞和貼壁細(xì)胞對5FU耐藥性、體外克隆形成能力以及移植成瘤能力差異；流式細(xì)胞儀分析SGC-7901球細(xì)胞和貼壁細(xì)胞中Lgr5的陽性率；將SGC-7901球細(xì)胞分成三組：B7-H1刺激組（PD-1 Ig，5μg/ml）、B7-H1阻斷組(PD-1 Ig，5μg/ml；anti-B7-H1 Ab,10μg/ml)、對照組（PBS），加入INF-

3、γ(100ng/ml)刺激，每組分別進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測Ki67+細(xì)胞比例、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　(一)胃癌組織中，Lgr5+/B7-H1+細(xì)胞中 Ki67+細(xì)胞比例比 Lgr5+/B7-H1-細(xì)胞中Ki67+細(xì)胞比例明顯增高（圖1）；
　　(二) SGC-7901可以在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)出球細(xì)胞，并且其球細(xì)胞可以在 INF-γ的誘導(dǎo)下表達(dá)B7-H1（圖2A、圖3B）； SGC-7901-SC

4、的干細(xì)胞標(biāo)記物（CD133、CD-166、Lgr5、Sox2、Nanog、ALDH、CD44）表達(dá)均顯著高于SGC-7901-AC。其增殖能力和腫瘤耐藥性也都顯著強(qiáng)于SGC-7901-AC(圖2B、圖2C、圖2D、圖3A)；
　　(三) PD-1Ig可以通過激活B7-H1,而使SGC-7901-SC在細(xì)胞水平和動(dòng)物整體水平的增殖能力顯著增強(qiáng)。并且抑制B7-H1可以減弱SGC-7901-SC的增殖能力（圖4）
　　結(jié)論：