高效液相色譜法同時測定血漿吲哚及3-甲基吲哚的方法學研究及應用.pdf

1、目的：
　　1.建立一種快速、靈敏的高效液相色譜-熒光檢測（High performance liquid chromatography-fluorescence detection，HPLC-FD）法同時測定血漿吲哚（2,3-benzopyrrole，Indole）與3-甲基吲哚(3-methylindole，Skatole)濃度。
　　2.用所建立的方法測定正常孕婦，妊娠期糖尿?。╣estational diabetes

2、 mellitus，GDM）患者和妊娠合并乙肝患者血漿中吲哚和3-甲基吲哚的含量，從而探討妊娠期間,孕婦在生理和病理狀態(tài)下血漿中吲哚類代謝物的變化。
　　方法：
　　1.采用Shim-Pack VP-ODS柱（150 mm×4.6 mm；4.6μm）分離，以甲奈酚（1-Naphthol）為內標（internal standard，IS）。流動相為15 mmol／L磷酸二氫鈉溶液-甲醇（40：60，v／v）；流速0.8 ml/

3、min；柱溫30℃；進樣量：50μL；激發(fā)光波長（λex）和發(fā)射光波長（λem）分別為274 nm和340 nm；分析時間10.5min。
　　2.利用該方法測定正常孕婦（n=46），GDM患者（n=44）和妊娠合并乙肝血漿（n=29）中吲哚和3-甲基吲哚的含量。
　　結果：
　　1.吲哚，IS和3-甲基吲哚保留時間分別為6.03，8.70，9.62 min。吲哚和3-甲基吲哚線性范圍分別為：2.22~88.89μg／

4、L，1.11~44.4μg／L，最低檢測限分別為：0.11μg／L和0.06μg／L。2種物質的平均回收率為95.5﹪~112.3﹪，日內和日間變異系數(shù)均小于6.8﹪。
　　2.與正常對照組相比，GDM患者血漿中吲哚和3-甲基吲哚濃度均顯著性升高（P＜0.05）。
　　3.在GDM患者中，胰島素抵抗亞組血漿吲哚濃度低于胰島素非抵抗組3.48倍（P＜0.05）。胰島素抵抗患者3-甲基吲哚水平高于非胰島素抵抗患者，但差異無統(tǒng)計學

5、意義（P＞0.05）。
　　4.控制基礎變量年齡后,吲哚濃度與胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）呈負相關（r=-0.306，P＜0.05）。
　　5.妊娠合并乙肝患者血漿吲哚和3-甲基吲哚濃度高于正常對照組1.0倍和0.75倍（P＜0.005），兩組間的差異具有統(tǒng)計學意義。
　　6.在妊娠合并乙肝組中，吲哚分別與ALT(r=0.620,P＜0.001)，AST(r=0.665,P＞0.001)，ALB(r=0.561,P

6、=0.002)呈顯著正相關,3-甲基吲哚與ALT（r=0.704,P＜0.001),AST（r=0.744,P＜0.001)呈強相關。
　　7.Logical回歸分析提示吲哚與3-甲基吲哚是妊娠過程中并發(fā)乙肝的危險因子(優(yōu)勢比OR=1.210,95%CI:1.040–1.408，P＜0.05；OR=4.56，95%CI:1.57-13.21,P＜0.05)。
　　結論：
　　1.本文建立了一種HPLC-FD法同時檢測血