亞高溫盆腔區(qū)域熱療聯(lián)合HSP70-PC治療浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、為探討亞高溫盆腔區(qū)域熱療治療浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的機(jī)理，以及熱休克蛋白70-肽復(fù)合物(HSP70-PC)治療浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的機(jī)理，進(jìn)一步探索該兩種方法聯(lián)合治療的效果和機(jī)理，本研究進(jìn)行了六部分實(shí)驗(yàn)： 第一部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療誘導(dǎo)原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤HSP70表達(dá)的研究 目的:研究不同熱療方案的亞高溫盆腔區(qū)域熱療誘導(dǎo)原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤發(fā)生熱休克反應(yīng)后HSP70的表達(dá)規(guī)律。 方法:經(jīng)尿道膀胱灌注MNU制備原

2、位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤動(dòng)物模型。分為腫瘤對(duì)照組(A組)、單次熱療組(B組)、間隔24小時(shí)再次熱療組(C組)、間隔72小時(shí)再次熱療組(D組)。用內(nèi)生場(chǎng)熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃，持續(xù)1小時(shí)。用膠體金免疫電鏡技術(shù)檢測(cè)HSP70在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的部位，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞HSP70陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率，并用表面加強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)腫瘤組織勻漿上清液中HSP70表達(dá)量(HSP70Intensity和HSP70MZArea)

3、的變化。 結(jié)論:不同方案的亞高溫盆腔區(qū)域熱療均能誘導(dǎo)原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤發(fā)生熱休克反應(yīng)，上調(diào)HSP70表達(dá)。亞高溫盆腔區(qū)域熱療是一種溫和的加熱方法，它不能使全部腫瘤細(xì)胞發(fā)生熱休克反應(yīng)。HSP70表達(dá)率不與熱療次數(shù)成正相關(guān)，但表達(dá)量與熱療次數(shù)成正相關(guān)。間隔24小時(shí)再次熱療組的HSP70表達(dá)量最高。 第二部分 大鼠膀胱腫瘤HSP70-PC的純化研究 目的:分離純化經(jīng)亞高溫盆腔區(qū)域熱療處理后大鼠膀胱腫瘤組織中

4、的熱休克蛋白70-肽復(fù)合物(HSP70-PC)。 方法:經(jīng)尿道膀胱灌注MNU制備原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤，用內(nèi)生場(chǎng)熱療系統(tǒng)加熱大鼠盆腔，用改良的液相色譜三步法從大鼠膀胱腫瘤組織中分離純化HSP70-PC，用SDS-PAGE、Westernblotting、表面加強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS)鑒定純化的HSP70-PC及與其結(jié)合的多肽。 結(jié)論:應(yīng)用我們改良的液相色譜三步法可以純化獲得高純度的HSP

5、70-PC。 第三部分 同種腫瘤來(lái)源的HSP70-PC對(duì)原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的治療研究 目的:研究用來(lái)自亞高溫盆腔區(qū)域熱療后原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的熱休克蛋白70-肽復(fù)合物(HSP70-PC)對(duì)原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的治療機(jī)制。 方法:將HSP70-PC用于治療相同品系的腫瘤鼠，觀察療效。經(jīng)尿道膀胱灌注MNU制備原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤動(dòng)物模型。將動(dòng)物隨機(jī)分為A(腫瘤對(duì)照)組、B(HSP70-PC治療)組

6、、C(腫瘤細(xì)胞裂解液治療)組，每組5只。皮下注射治療一月后對(duì)膀胱腫瘤、膀胱引流區(qū)域髂動(dòng)脈及腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)、脾臟進(jìn)行病理研究，ELISA檢測(cè)血清RatIFN-γ含量。 結(jié)論:皮下注射HSP70-PC可以上調(diào)原位浸潤(rùn)性膀胱腫瘤大鼠的細(xì)胞免疫狀態(tài)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖無(wú)影響。 第四部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療對(duì)原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤形態(tài)學(xué)影響的研究 目的:對(duì)不同方案和療程的亞高溫盆腔區(qū)域熱療后浸潤(rùn)性

7、膀胱腫瘤形態(tài)學(xué)改變進(jìn)行病理研究。 方法:制備原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤動(dòng)物模型，分為短期組和長(zhǎng)期組。用內(nèi)生場(chǎng)熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃，不同組別熱療次數(shù)及療程不同。短期組中分為腫瘤對(duì)照組(A組)、單次熱療組(B組)、間隔24小時(shí)再次熱療組(C組)、間隔72小時(shí)再次熱療組(D組)。長(zhǎng)期組中分為腫瘤對(duì)照組(E組)、間隔24小時(shí)再次熱療組(F組)、間隔72小時(shí)再次熱療組(G組)，治療4周。熱療后對(duì)腫瘤進(jìn)行病理研究。 結(jié)論:

8、亞高溫盆腔區(qū)域熱療可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，長(zhǎng)期的間歇熱療未導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)熱耐受。 第五部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療對(duì)浸潤(rùn)性膀胱腫瘤大鼠免疫狀態(tài)影響的研究 目的:研究不同方案和療程的亞高溫盆腔區(qū)域熱療使原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤發(fā)生熱休克反應(yīng)后機(jī)體免疫狀態(tài)的改變。 方法:制備原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤動(dòng)物模型，分為短期組和長(zhǎng)期組。用內(nèi)生場(chǎng)熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃。對(duì)不同方案及不同療程的亞高溫盆腔區(qū)

9、域熱療后腫瘤鼠免疫狀態(tài)的改變進(jìn)行病理，ELISA檢測(cè)血清RatIFN-γ含量。 結(jié)論:隨著亞高溫盆腔區(qū)域熱療次數(shù)的增加，腫瘤鼠的免疫細(xì)胞重新分布，有利于腫瘤抗原遞呈及效應(yīng)細(xì)胞攻擊腫瘤。 第六部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療聯(lián)合HSP70-PC治療原位大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的研究 目的;觀察亞高溫盆腔區(qū)域熱療聯(lián)合皮下注射HSP70-PC治療大鼠浸潤(rùn)性膀胱腫瘤的療效，初步闡釋聯(lián)合治療的機(jī)理。 方法:制備原位大鼠浸

10、潤(rùn)性膀胱腫瘤動(dòng)物模型，分為A(腫瘤對(duì)照組)、B(熱療組)、C(HSP70-PC治療組)、D(聯(lián)合治療組)四組。用內(nèi)生場(chǎng)熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃。將亞高溫盆腔區(qū)域熱療與皮下注射HSP70-PC序貫治療一個(gè)月后對(duì)腫瘤、引流淋巴結(jié)、脾臟進(jìn)行病理研究，檢測(cè)血清RatIFN-γ含量。 結(jié)論:亞高溫盆腔區(qū)域熱療產(chǎn)生的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、上調(diào)免疫狀態(tài)的作用，與HSP70-PC誘發(fā)的抗腫瘤免疫效應(yīng)具有協(xié)同互補(bǔ)作用和疊加