雌激素通過細胞外信號調節(jié)激酶-鈣蛋白酶-局部黏著斑激酶通路抑制乳腺癌細胞失巢凋亡.pdf

1、目的:本研究旨在觀察17β-雌二醇（E2）對MCF-7乳腺癌細胞抗失巢凋亡能力的影響及鈣激活蛋白酶（CANP）-局部黏著斑激酶(FAK)通路在其中的介導作用,探討雌激素促進乳腺癌惡性進展的信號機制，為探尋乳腺癌的高效治療方法提供實驗依據。
　　實驗方法：以雌激素受體(ER)陽性 MCF-7乳腺癌細胞為研究模型(激素敏感性細胞MCF-10A,及激素非敏感性MDA-MB-231作為對照)，聚甲基丙烯酸羥乙基酯（poly-Hema）涂層

2、培養(yǎng)細胞誘導失巢凋亡，E2刺激及 MEK和FAK抑制劑預處理細胞，通過蛋白印跡法觀察蛋白表達變化及ERK和FAK磷酸化情況，MTT法及臺盼藍染色/細胞計數法檢測細胞存活力，Hoechst熒光染色法檢測細胞凋亡。
　　實驗結果：
　　1) E2增強MCF-7細胞抗失巢凋亡能力及ERK/FAK磷酸化。與細胞貼壁培養(yǎng)比較，poly-Hema懸浮培養(yǎng)可明顯降低MCF-7細胞的存活率；以E2處理懸浮培養(yǎng)細胞24 h，發(fā)現E2可明顯提高

3、細胞存活率及減少細胞凋亡；E2還能提高細胞在細胞致死劑嘌呤霉素作用下的細胞存活力。此外，E2處理可增強模型細胞 ERK和FAK的磷酸化。
　　2) U0126及Calpeptin抑制E2誘導的ERK/FAK磷酸化及抗失巢凋亡效應。以E2處理模型MCF-7細胞12 h，發(fā)現以MEK抑制劑U0126預處理細胞，則E2誘導的ERK和FAK磷酸化均受到顯著抑制，同時 E2的抗失巢凋亡作用也明顯減弱；采用CANP抑制劑預處理模型細胞可明顯抑

4、制ERK磷酸化及E2的抗失巢凋亡效應。
　　3)乳腺腫瘤細胞CANP活性明顯高于正常乳腺上皮細胞。MCF-7細胞在E2或表皮生長因子（EGF）的作用下，其胞內CANP易于被激活，并可被CANP抑制劑阻斷；在MBDA-MB-231，CANP對EGF刺激也很敏感。相反，MCF-10A細胞內CANP對E2或EGF刺激均不敏感。
　　4) FAK抑制劑抑制E2誘導的ERK磷酸化及抗失巢凋亡效應。采用FAK抑制劑（FI）預處理模型細胞