甘露糖受體在脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷中的表達(dá).pdf

1、前言： 甘露糖受體(mannose receptor，MR)，作為一個(gè)固有的模式識(shí)別受體，在巨噬細(xì)胞、未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞及一部分內(nèi)皮細(xì)胞中都有表達(dá)，是一種重要的抗原提呈分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體。 急性肺損傷(acute lung injury，ALI)，是呼吸系統(tǒng)疾病中的危重癥，其定義是：心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素引起的急性，進(jìn)行性缺氧性呼吸衰竭，是肺部炎癥和通透性增加的綜合征。對(duì)慢性鼻竇炎和鼻息肉病人的研究發(fā)現(xiàn)，鼻息肉患者

2、的鼻竇粘膜處巨噬細(xì)胞MR的mRNA有明顯的升高[1]。Marzolo MP亦發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)巨噬細(xì)胞—腦小膠質(zhì)細(xì)胞表面的MR能被地塞米松上調(diào)[2]。但是甘露糖受體在急性肺損傷中的表達(dá)情況及其在急性肺損傷中的作用機(jī)制，目前國(guó)內(nèi)外還未有報(bào)道。 目的： 研究甘露糖受體在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷中的表達(dá)情況，并探討其可能的作用機(jī)制，為臨床藥物治療找尋新的靶點(diǎn)。 方法： 雄性S

3、D小鼠，隨機(jī)分為3組：1．對(duì)照組；2．模型組；3．地塞米松(dexameathone，DXM)(0.5 mg/kg)組。通過(guò)氣管內(nèi)滴注LPS(3 mg/kg)建立ALI模型，地塞米松組在滴注前5分和滴注后3小時(shí)，尾靜脈注射地塞米松(dexameathone，DXM)(0.5mg/kg)，對(duì)照組注射相應(yīng)劑量0.9％生理鹽水。滴注LPS6小時(shí)后處死動(dòng)物，行肺濕/干重比，肺滲透指數(shù)(pulmonary permeability index，P

4、PI)，支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，肺和BALF中髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)，單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotacticprotein1，MCP-1)活性，腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)—α，白介素(interleukin，IL)-10檢測(cè)，并觀察光學(xué)顯微鏡下肺損傷的程度

5、。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT—PCR測(cè)定各組中甘露糖受體(MR)的含量，并用Western Blot檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子—κB(nuclear transcription factor—κB，NF—κB)的蛋白表達(dá)水平，觀察急性肺損傷中甘露糖受體的表達(dá)情況及其與核轉(zhuǎn)錄因子—κB的關(guān)系，探討甘露糖受體在急性肺損傷中的作用及其可能的機(jī)制。 結(jié)果： 1．甘露糖受體在LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷中表達(dá)下調(diào)：本實(shí)驗(yàn)以氣管內(nèi)滴入LPS誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生A

6、LI，動(dòng)物模型表現(xiàn)出肺泡內(nèi)PMN的大量滲出，肺泡壁對(duì)液體和蛋白的滲透性升高，肺濕/干重比、PPI、BALF中白細(xì)胞和PMN計(jì)數(shù)、肺勻漿中和BALF中MPO、TNF—α和IL-1b水平顯著增高，以及肺部的ALI的病理?yè)p傷改變．以上均為小鼠ALI的基本特征，提示本實(shí)驗(yàn)小鼠ALI模型建立成功。實(shí)時(shí)定量RT—PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)急性肺損傷模型中甘露糖受體mRNA的量下降，比正常對(duì)照組下降了約20.1％(P＜0.05)。 2．地塞米松拮抗LPS

7、誘導(dǎo)的急性肺損傷炎癥并上調(diào)MR：LPS組的肺濕/干重比(4.67±0.37)與正常組(4.07±0.31)比較明顯升高(P＜0.05)，DXM(0.5 mg/kg)靜脈注射明顯抑制LPS誘導(dǎo)的肺部水腫(P＜0.05)。LPS組肺勻漿中MPO水平升高，與對(duì)照組比較上升了58.8％(P＜0.05)，地塞米松減少LPS誘導(dǎo)的肺勻漿中MPO活性的上升(P＜0.05)。LPS組的BALF中的TNF—α、IL-1b和MCP-1水平顯著上升，分別達(dá)到

8、對(duì)照組的24倍、12倍和16倍(P＜0.01)，DXM(0.5mg/kg)靜脈注射明顯抑制TNF—α、IL-1和MCP-1(p＜0.05)的活性。實(shí)時(shí)定量RT—PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)地塞米松組中甘露糖受體mRNA的量上調(diào)，比LPS組增加了約66.3％(P＜0.05)。 3．上調(diào)甘露糖受體能抑制LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷中NF—κB/p65的表達(dá)：WesternBlot檢測(cè)顯示，在正常肺組織中有低水平的NF—κB/p65表達(dá)，經(jīng)LPS(3 m

9、g/kg)刺激6h后肺組織中NF—κB/p65表達(dá)明顯增高，達(dá)到正常對(duì)照組的4.5倍。預(yù)先給予DXM(0.5mg/kg)靜脈注射，能明顯抑制LPS所誘導(dǎo)的急性肺損傷中NF—κB/p65高水平表達(dá)。 結(jié)論： 甘露糖受體在脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷中表達(dá)下調(diào)，通過(guò)上調(diào)其水平能抑制急性肺損傷肺組織中NF—κB/p65蛋白的表達(dá)，提示甘露糖受體可能與NF—κB信號(hào)通路有關(guān)，進(jìn)而在mRNA水平上抑制LPS所致的急性肺損傷中TNF—α、