KW6002對(duì)BUCY預(yù)處理小鼠異基因骨髓移植后aGVHD的影響.pdf

1、目的:建立一種應(yīng)用白消安聯(lián)合環(huán)磷酰胺(BU-CY)化療預(yù)處理為基礎(chǔ)的小鼠異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem celltransplantation，allo-HSCT)急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease，aGVHD)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上研究腺苷A2A受體拮抗劑KW6002對(duì)異基因移植后aGVHD的影響。
　　方法:
　　1.供

2、鼠選擇雄性C57BL/6(H-2b)小鼠，受鼠選擇雌性BALB/C(H-2d)小鼠。受鼠骨髓移植前進(jìn)行BU-CY方案化療預(yù)處理:根據(jù)化療劑量分3組，第1-4天腹腔注射白消胺(35，38，40 mg/kg/day)，第5-6天腹腔注射環(huán)磷酰胺(100mg/kg/day)。休息一天，于第8天經(jīng)尾靜脈回輸供鼠骨髓細(xì)胞(2×107)和脾細(xì)胞(2×107)的混懸液，誘導(dǎo)異基因骨髓移植aGVHD的小鼠模型。外加同基因骨髓移植組、單純預(yù)處理組及DMS

3、O對(duì)照組共6組，移植后定期觀察并記錄受鼠的體重，弓背、腹瀉、脫毛、活動(dòng)度、精神等一般情況、存活情況、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及病理檢查等判斷aGVHD的程度。
　　2.建立BU-CY化療預(yù)處理的異基因骨髓移植后aGVHD的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，分腺苷A2A受體拮抗劑KW6002腹腔注射處理的異基因骨髓移植組和單純異基因骨髓移植組，外加同基因骨髓移植對(duì)照組、蓖麻油+DMSO對(duì)照組共4組。移植后定期觀察并記錄受鼠的體重，弓背、腹瀉、脫毛、活動(dòng)度、精神等一般

4、情況、存活情況、白細(xì)胞數(shù)及病理檢查，小鼠瀕死時(shí)取脾臟用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析脾臟CD4細(xì)胞胞內(nèi)干擾素γ(IFN-γ)、白介素4（IL-4）、白介素17(IL-17A)三種細(xì)胞因子表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.BU-CY化療方案預(yù)處理受鼠時(shí)BU劑量為40mg/kg/day的受鼠組小鼠移植后體重進(jìn)行性下降，移植后6天內(nèi)小鼠全部死亡，未觀察到明顯的aGVHD的弓背、腹瀉、脫毛等臨床癥狀;BU劑量為35mg/kg/day的受鼠組移植后體重

5、下降，第9天體重回升，觀察到弓背、活動(dòng)度差，翹毛等輕微aGVHD的臨床癥狀，aGVHD病理改變不明顯，小鼠長(zhǎng)期存活（生存時(shí)間）30天），流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示供鼠細(xì)胞不能完全完全植入;BU劑量為38mg/kg/day受鼠組小鼠可在相對(duì)集中的時(shí)間內(nèi)觀察到典型aGVHD的弓背、腹瀉、脫毛、活動(dòng)度差、精神差等臨床癥狀，皮膚、肝臟和腸道臟器病理活檢提示有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，各臟器組織結(jié)構(gòu)遭到破壞等aGVHD病理改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示外周血供鼠細(xì)胞完全完

6、全植入達(dá)95％以上。同基因骨髓移植組和DMSO對(duì)照組小鼠均長(zhǎng)期存活（生存時(shí)間）30天）。單純預(yù)處理組化療后小鼠在10天內(nèi)全部死亡。
　　2.腺苷A2A受體拮抗劑KW6002處理組在相對(duì)集中的時(shí)間內(nèi)觀察到典型aGVHD的弓背、腹瀉、脫毛、活動(dòng)度差、精神差等臨床癥狀，皮膚、肝臟和腸道臟器的aGVHD病理改變。與單純異基因骨髓移植組相比較，KW6002處理小鼠移植后的弓背、腹瀉、脫毛等aGVHD臨床癥狀明顯嚴(yán)重。腺苷A2A受體拮抗劑KW

7、6002處理組GVHD評(píng)分為(7.50±0.58)，單純異基因骨髓移植組GVHD評(píng)分為(5.25±0.96)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。腺苷A2A受體拮抗劑KW6002處理組中位生存期(14.83±0.76)，單純異基因骨髓移植組中位生存期(18.83±0.29)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析顯示腺苷A2A受體拮抗劑KW6002處理組脾臟CD4細(xì)胞胞內(nèi)IFN-γ、IL-17A因子表達(dá)比單純異基因骨髓移植組

8、顯著升高(P＜0.05)，IL-4因子表達(dá)則無差別(P＞0.05)。同基因骨髓移植對(duì)照組和蓖麻油+DMSO對(duì)照組移植后小鼠均長(zhǎng)期存活（生存時(shí)間）30天）。
　　結(jié)論:經(jīng)BU-CY(BU38 mg/kg/day+CY100 mg/kg/day)方案預(yù)處理后回輸異基因骨髓細(xì)胞(2×107)和脾細(xì)胞(2×107)能成功構(gòu)建化療預(yù)處理為基礎(chǔ)的aGVHD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。腺苷A2A受體拮抗劑KW6002處理后小鼠aGVHD癥狀加重，炎癥因子表達(dá)