mTOR信號促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成和抑制泡沫細(xì)胞消退的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　動脈粥樣硬化是一種慢性免疫炎癥性疾病伴隨血脂異常。我們之前的研究提示SIRT1能通過LXR/NF-κB信號通路防治動脈粥樣硬化。最近很多的研究集中在mTOR信號與心血管疾病的關(guān)系上。本研究旨在探究mTOR信號與SIRT1-LXR-CCR7/NF-κB信號在動脈粥樣硬化的關(guān)系。
　　方法：
　　U937細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI1640中，佛波酯作用24h誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞后，隨機(jī)分成5組：對照組，高脂

2、組，高脂+高膽固醇組，高脂+高膽固醇+LPA組，高脂+高膽固醇+LPA+Rapa組。油紅O染色觀察細(xì)胞中脂質(zhì)的積累情況；MTT法測細(xì)胞活力；實(shí)時定量PCR法與Western blot法分別檢測mTOR，pS6K，SIRT1，LXRα，CCR7，NF-κB，TNF-α的表達(dá)；免疫熒光法檢測NF-κB的核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象。
　　結(jié)果：
　　1.為了誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成，U937細(xì)胞與佛波酯共培養(yǎng)24小時分化為巨噬細(xì)胞，隨后在高脂高膽固醇的環(huán)

3、境中再培養(yǎng)24小時，形成泡沫細(xì)胞。油紅O染色提示泡沫細(xì)胞中積累了大量的脂滴。同時，Western blot結(jié)果提示p-mTOR及其下游p-pS6K的蛋白表達(dá)增加。
　　2.油紅O染色結(jié)果提示，在高脂高膽固醇+溶血磷脂酸（LPA）模擬致動脈粥樣硬化的環(huán)境下，細(xì)胞中的脂滴進(jìn)一步積累；實(shí)時定量PCR和Western blot結(jié)果表明，SIRT1,LXRαand CCR7的表達(dá)下調(diào)，而NF-κB及其下游因子TNF-α的表達(dá)上調(diào)。
　

4、　3.在泡沫細(xì)胞形成和抑制其移出的過程中，作為mTOR抑制劑中的一種，雷帕霉素在100nM的濃度下作用12小時顯著抑制mTOR和pS6K的表達(dá)活性。同時觀察到SIRT1，LXRα，CCR7的表達(dá)上調(diào)，相反，NF-κB和TNF-α的表達(dá)下調(diào)。
　　4.免疫熒光分析提示，泡沫細(xì)胞胞核內(nèi)的NF-κB蛋白表達(dá)多于核外，提示泡沫細(xì)胞形成中NF-κB被激活，然而，在100nM Rapa作用下胞核內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)減少，提示NF-κB表達(dá)被抑