Interleukin-34對(duì)巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞形成的調(diào)控研究.pdf

1、研究背景:
　　巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞吞噬脂質(zhì)(特別是氧化低密度脂蛋白o(hù)xidizedLow-density Lipoprotein，ox-LDL)形成泡沫細(xì)胞(Foam Cell)是動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)病理過程的中心環(huán)節(jié)，貫穿在早期脂紋形成到斑塊破裂的整個(gè)過程。多種細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)泡沫細(xì)胞的形成。白介素-34(Interleukin-34，IL-34)是2008年發(fā)現(xiàn)的一種新細(xì)胞因子，與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)

2、炎(Rheumatoid Arthritis，RA)、潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)等多種慢性免疫性炎癥疾病患者有明顯相關(guān)性，被認(rèn)為是一種致炎因子。近來研究發(fā)現(xiàn)其在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者血清水平中高表達(dá)，且與冠脈病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性。
　　研究目的:
　　IL-34在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病等慢性炎癥疾病患者血清水平中高表達(dá)，提示其可能是一種致炎因子，而IL-34是否影響泡沫細(xì)胞的形成還未見報(bào)道，

3、因此探究IL-34對(duì)泡沫細(xì)胞形成的影響及探究其可能的機(jī)制，為進(jìn)一步闡明動(dòng)脈粥樣硬化病理過程可能的機(jī)制、尋找新的臨床治療靶點(diǎn)提供重要線索。
　　研究方法與結(jié)果:
　　1.本研究首先利用ox-LDL誘導(dǎo)原代小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞(BoneMarrow-derived Macrophages，BMDMs)，建立體外巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型。將細(xì)胞分為對(duì)照組、oxLDL組(40μ g/ml)、低劑量組(oxLDL40μg/ml+IL-

4、3420 ng/nl)、高劑量組(oxLDL40μ g/ml+IL-3450 ng/ml)。油紅O染色及測定細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量，觀察每組泡沫細(xì)胞形成情況，結(jié)果顯示高劑量組(IL-3450 ng/ml)泡沫細(xì)胞形成明顯加重，而低劑量組(IL-3420 ng/ml)與oxLDL組相比未見明顯變化，提示IL-3450 ng/ml可以促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成。因此，接下來我們的實(shí)驗(yàn)均基于IL-3450 ng/ml探究其對(duì)泡沫細(xì)胞形成的影響。
　　

5、2.泡沫細(xì)胞的形成是脂質(zhì)攝取與流出的動(dòng)態(tài)平衡受損。為探究IL-34是通過影響巨噬細(xì)胞哪個(gè)過程促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成，我們分別檢測了巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝取及膽固醇流出過程，結(jié)果表明:IL-34增加巨噬細(xì)胞脂質(zhì)的攝?。ú町愑薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義），而不影響膽固醇的流出過程。
　　3.巨噬細(xì)胞主要通過細(xì)胞表面的清道夫受體攝取脂質(zhì)。利用westernblot技術(shù)、RT-PCR技術(shù)分別檢測四組細(xì)胞清道夫受體CD36、SR-A、Lox-1的蛋白、mRNA表達(dá)水平

6、，結(jié)果提示只有CD36的表達(dá)顯著上調(diào)（有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異）。利用特異性抗體阻斷CD36受體，IL-34誘導(dǎo)不能增加巨噬細(xì)胞脂質(zhì)的攝取。結(jié)果提示:IL-34是通過上調(diào)巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36的表達(dá)而增加脂質(zhì)的攝取。另外，IL-34能夠使增加oxLDL誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥因子IL-6、TNF-α、IL-1β分泌，炎癥反應(yīng)的加重可能與脂質(zhì)攝取過程協(xié)同加重泡沫細(xì)胞的形成。
　　4.為研究IL-34調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝取過程的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，我們利用