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1、海帶是一種重要的海產(chǎn)資源,富含生物活性大分子多糖,具有抗免疫調(diào)節(jié),抗腫瘤,抗凝血和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的醫(yī)學(xué)功效。近幾年研究發(fā)現(xiàn),硫酸化修飾可改良多糖的生物活性,而巨噬細(xì)胞泡沫化常出現(xiàn)在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的初期。本文主要開展了海帶多糖(LJP61A)硫酸化修飾及修飾產(chǎn)物對(duì)oxLDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞源性泡沫化細(xì)胞形成的影響研究,現(xiàn)取得的研究結(jié)果如下:
(1)通過水提醇沉法從海帶中提取海帶粗多糖,使用DEAE-Cellulose離子交換和S
2、ephacryl S-500凝膠滲透兩種色譜技術(shù)對(duì)海帶粗多糖進(jìn)行分離純化,得到均一組分多糖LJP61A,分子量為1.96×106Da,并對(duì)LJP61A進(jìn)行脫硫酸反應(yīng),獲得DS-LJP。運(yùn)用氯磺酸吡啶法(CSA-Pyr)對(duì)海帶多糖均一組分進(jìn)行硫酸化修飾,設(shè)置不同反應(yīng)時(shí)間,得到了三種不同取代度的海帶多糖硫酸化衍生物:SLJP-1,SLJP-2,SLJP-3,硫酸根取代度分別為:1.06、1.28和1.56。高效液相法測(cè)定其分子量分別為1.0
3、5×107Da、1.87×107Da和2.36×107Da。
(2)DS-LJP,SLJP-1,SLJP-2,SLJP-3對(duì)oxLDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞源性泡沫化形成的抑制作用及調(diào)控機(jī)制:研究海帶多糖硫酸化衍生物干預(yù)oxLDL誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞泡沫化模型發(fā)現(xiàn),濃度為25ug/mL的多糖硫酸化衍生物SLJP-1,SLJP-2,SLJP-3可以明顯減少細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)聚集,其中SLJP-3效果最為明顯。海帶多糖經(jīng)過硫酸化之后獲得硫酸化
4、衍生物SLJP-1,SLJP-2和SLJP-3,均有不同程度的抗oxLDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞泡沫化特性,尤以SLJP-3的抗巨噬細(xì)胞泡沫化效果最為顯著。結(jié)合RT-PCR和Western bolt實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可以推測(cè),海帶多糖硫酸化衍生物SLJP-3可能是通過下調(diào)細(xì)胞中的TC含量,下調(diào)促炎相關(guān)細(xì)胞因子TNF-α,IL-6,IL-1β以及上調(diào)抑炎因子IL-10的釋放,干預(yù)MAPKs信號(hào)通路,對(duì)細(xì)胞炎性的發(fā)展起到一定的抑制作用,進(jìn)而抑制
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